随着现代科学技术的发展，结合现代最新的科学科技成果及科研手段，探索复方的配伍规律和合理性，为更有效地指导临床和中药新产品的研创具有非常重要的理论和实践意义。三子丸始载于唐代《千金要方》，由五味子、菟丝子和蛇床子三味中药配伍而成，具有补肾、壮阳、强壮之功是毫无疑义的。根据中医“肾主骨”原理，补肾中药多可增强骨质起到抗骨质疏松作用。 本实验旨在设计工艺对五味子、菟丝子和蛇床子主要活性成分进行纯化，结合体外成骨和破骨细胞实验探寻各提取物的抗骨质疏松活性成分，并进一步通过体外细胞实验验证以五味子、菟丝子和蛇床子配伍的三子丸的配伍合理性，寻找最佳配伍。现代中药化学的定量分析手段，采用UV和HPLC法对中药以及各提取物进行含量检测，建立了五味子中总木脂素，单体化合物五味子甲素、五味子醇乙、五味子乙素；菟丝子中总黄酮，单体化合物槲皮素、山奈酚；蛇床子中总香豆素，单体化合物蛇床子素、欧芹属素乙、佛手柑内酯的UV和HPLC定量方法，通过方法学考察，实验精密度高、重现性和稳定性良好，回收率实验符合要求，该方法可以用于五味子中木脂素、菟丝子中黄酮和蛇床子中香豆素含量的准确定量。采用成骨细胞对过大孔树脂不同浓度乙醇洗脱得到的提取物进行初步筛选，MTT法和ALP活性测定发现，大孔树脂纯化、70％乙醇洗脱得到的五味子提取物TL2(总木脂素65.19％，w/w)，菟丝子提取物TF1、TF2和TF3，以及蛇床子提取物(总香豆素67.79％，w/w)均表现很强的成骨细胞增殖和分化作用，具有潜在的抗骨质疏松活性。故进一步设计工艺，以正交实验和大孔树脂吸附纯化，以求得到含量较高的五味子总木脂素提取物、菟丝子总黄酮提取物和蛇床子总香豆素提取物，结果发现：对于五味子采用10倍量95％乙醇回流提取120min，提取两次的工艺，可对五味子中木脂素进行了较大程度的的富集，当采用大孔吸附树脂AB-8纯化时对五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的饱和吸附分别为0.16，0.75和0.62 mg/g，以最佳浓度10:125(样品:溶剂量)上样后，70％的乙醇洗脱可得到含量为65.18％(w/w)的木脂素成分。对于菟丝子子采用10倍量95％乙醇回流提取90min，提取两次的工艺，可对菟丝子中黄酮类进行了较大程度的的富集，当采用大孔吸附树脂AB-8纯化时对槲皮素和山奈酚饱和吸附分别为0.0004和0.0012mg/g，以最佳浓度10:100(样品:溶剂量)上样后50％的乙醇洗脱，可得到含量为65.18％(w/w)的黄酮类成分。对于蛇床子采用95％乙醇冷浸24h或超声1h即可得到80％-90％左右的总香豆素，使蛇床子总香豆素得到了很好的富集。结合成骨和破骨细胞对不同浓度的各提取物进行抗骨质疏松活性筛选实验。结果发现3mg/ml的五味子TL 2和蛇床子提取物可以明显的引起成骨样细胞UMR106的增殖和分化(p<0.05)，并且其作用强于10<-9>mol/L的阳性对照药17-β雌二醇的效果(p<0.05)。而菟丝子总黄酮提取物所引起作用就明显较五味子和蛇床子提取物弱。对于破骨细胞五味子、菟丝子和蛇床子提取物均表现出抗酒石酸酸性磷酸酶活性，抑制破骨细胞的增殖和分化p<0.01)。从而说明五味子、菟丝子和蛇床子提取物均具有明显的抗骨质疏松活性。根据各提取物抗骨质疏松的最佳浓度，以成骨和破骨细胞筛选进一步寻求五味子、菟丝子和蛇床子的配伍及配伍剂量关系。以五味子、菟丝子、蛇床子、五味子+菟丝子、五味子+蛇床子、蛇床子+蛇床子(重量比1:1)、五味子+菟丝子+蛇床子(重量比1:1:1)实验发现，当三味药配伍时，抗骨质疏松活性均优于两味药配伍或者单味药的效果，按照中医基础理论的“相使”原理，三味药配伍时发挥协同作用，产生更强的药效。不同剂量各提取物配伍设计U<,7>(7<3>)均匀实验，得到多元线性回归方程Y=1.248+0.000289X1-0.000955X2+0.000271X3 (F=3.060)，发现当蛇床子:五味子:菟丝子=2:1:1(活性部位质量比)配伍时具有更好的抗骨质疏松活性，与传统药方中的配伍用量五味子:菟丝子:蛇床子=1:1:1或2:1:1(重量比)情况有所不同，配伍用量的活理性需要进一步的进行考察。 本实验设计了工艺对五味子、菟丝子和蛇床子主要成分进行纯化，并通过成骨细胞和破骨细胞对五味子、菟丝子和蛇床子提取物以及不同剂量药材配伍组方的三子丸进行抗骨质疏松活性筛选，确定各提取物最优活性浓度和三子丸药材组方的最佳配方，为三子丸的进一步开发利用提供了可靠的理论依据。