目的：⑴了解长沙地区临床分离金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)对常用抗菌药物的耐药现状，探讨金黄色葡萄球菌对甲氧西林和万古霉素的耐药水平。⑵构建金葡菌甲氧西林耐药辅助基因femB的原核表达载体并在大肠杆菌中表达，为进一步研究金葡菌对甲氧西林的耐药机制奠定基础。　　 方法：①收集长沙地区11家医院2009年11月-2010年11月临床分离的非重复金葡菌279株，应用vitek-2全自动微生物分析系统进行鉴定，K-B法检测金葡菌对24种药物的敏感性，产色头孢菌素试验检测β-内酰胺酶以及D试验检测诱导型克林霉素耐药。②应用头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法筛查耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)；琼脂稀释法检测头孢西丁，苯唑西林和万古霉素的最低抑菌浓度(MIC)。(3)提取金葡菌基因组DNA，并以此为模板进行femB基因的PCR扩增，构建重组质粒pGEX-4T-1-femB，并将重组质粒导入大肠杆菌BL21中进行表达。采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证。　　 结果：⑴279株分离的金葡菌对24种药物的耐药分析显示，敏感率>50％的药物为9种，敏感率最高的为万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺，均为100％，其次为呋喃妥因(97.1％)、氯霉素(93.5％)和复方新诺明(87.1％)。耐药率>50％的抗菌药物有11种，其中以青霉素G和氨苄西林的耐药率最高，均为97.1％。MRSA的分离率为54.5％，除万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、呋喃妥因均高度敏感外，MRSA对常用的16种抗生素的耐药率均显著高于MSSA。⑵279株金黄葡菌中，β-内酰胺酶阳性250株(89.6％)，红霉素耐药而克林霉素敏感、中介的30株菌中，D试验阳性22株(73.3％)。⑶苯唑西林(OXA)和头孢西丁(FOX)MIC范围分别为0.125μg/ml～>256μg/ml和2μg/ml～>256μg/ml，苯唑西林的MIC50和MIC90分别为128μg/ml和256μg/ml，头孢西丁的MIC50和MIC90分别为64μg/ml和256μg/ml。万古霉素MIC范围为1～2μg/ml，MIC50和MIC90均为2μg/ml。(4)经PCR，双酶切以及测序验证，成功的构建了重组质粒pGEX-4T-1-femB；重组质粒转化大肠杆菌BL21经IPTG诱导后，SDS-PAGE和Western blot分析证实表达出49KDa目的蛋白。　　 结论：①长沙地区临床分离的金葡菌β-内酰胺酶阳性率，克林霉素诱导型耐药率均较高，且呈多重耐药特征。②长沙地区临床分离的金葡菌不仅MRSA分离率高，而且对甲氧西林呈高水平耐药；所有菌株对万古霉素均敏感，但MIC已接近中介水平，应引起高度重视。③成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-femB，并在大肠杆菌中高效的表达。