产酶溶杆菌抗菌活性物质产率促进及其应用

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农业生产中,化学农药的长期使用,导致了生态环境的恶化,为此,开发环境友好的生物源农药成了重点研究领域。产酶溶杆菌是一株新型生防菌,其次级代谢产物HSAF具有广谱的抗真菌活性,可以开发为良好的生物源农药,为达到此目的,本研究分3步进行了培养基优化试验:1.通过替换不同氮源及碳源,确立黄豆粉为最佳氮源,葡萄糖为最佳碳源,最佳氮源和碳源分别设置3个浓度(黄豆粉浓度为0.50%、0.70%、0.90%;葡萄糖浓度为0.30%、0.50%、0.70%)进行HSAF产率比较,初步得到碳氮源最佳配比:0.70%黄豆粉+0.50%葡萄糖;2.利用氮源和碳源最佳配比,比较不同无机盐对HSAF产量的影响;3.三因素三水平的正交试验,比较结果表明:黄豆粉0.70%、葡萄糖0.50%、氯化钙0.08%为最佳组合,其能够提高产酶溶杆菌HSAF产量13.9倍,且发酵成本可降低68%。除此以外,本研究还对产酶溶杆菌的发酵条件进行了优化,主要考虑了温度、转速及发酵时间等因素,HSAF在28℃,200 rpm,摇瓶60 h时产量最大。最后进行了刺激因子添加实验,采用产酶溶杆菌靶标生物禾谷镰孢菌的多糖物质作为刺激因子,观察其对HSAF的刺激作用,因实验条件有限仅得到了少量的粗多糖,实验结果表明,随着粗多糖添加量的增多,HSAF的含量呈不断下降的趋势。为了进一步探明产酶溶杆菌OH11发酵产物对主要农业病害的防控效果,本研究采用优化后的培养基进行发酵、物理吸附、65℃烘干浓缩获得发酵液固化物,采用平板抑菌、盆栽和田间接种等方法,测试了发酵液固化物对几种农作物重要病害的防控效果。以其代谢产物HSAF的量表示,发酵产物对稻瘟病菌、稻纹枯病菌、禾谷镰孢菌的菌丝生长抑制EC5o分别为2.1326、2.1457、3.6959μg/mL,对禾谷镰孢菌孢子萌发抑制EC5o为12.2587 μg/mL;对温室盆栽小麦白粉病具有保护和一定的治疗效果,用药22 d,10.24μg/mL发酵液的保护防效为58.15%,而150 μg/mL三唑酮的保护防效为45.93%。田间处理14 d,96.0 g a.i./hm2发酵液对小麦赤霉病保护与治疗效果分别为20.29%,21.14%,而1110.0ga.i./hm2的多菌灵为13.39%,12.00%;2014年,自然发病情况下,田间处理28 d,1.53 g a.i./hm2发酵液对小麦赤霉病的防治效果达到76.40%,优于对照药剂300.0 mL/hm2的30%苯甲·丙环唑乳油。由此可见,溶杆菌发酵产物对几种农作物重要病害均具有防治效果,具有开发利用前景。
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