【摘 要】
：
为构建烟台黑猪SLA-2基因(SLA-2-YT)的真核表达载体SLA-2-YT/pCDH并将其在真核细胞中表达,根据SLA-2-YT编码区基因序列设计1对引物,以SLA-2-YT/pMD18-T全基因克隆表达载体为模板进行PCR扩增获得SLA-2-YT编码区基因片段,在上下游引物的5\'端分别添加限制性内切酶Xba Ⅰ和Not Ⅰ的酶切位点,将目的基因经pMD 19-T Simple Vector TA克隆后与pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro真核表达载体连接,获得的重组质粒转化至大肠杆菌St
【机 构】
：
大连大学生命科学与技术学院,大连 116622
论文部分内容阅读
为构建烟台黑猪SLA-2基因(SLA-2-YT)的真核表达载体SLA-2-YT/pCDH并将其在真核细胞中表达,根据SLA-2-YT编码区基因序列设计1对引物,以SLA-2-YT/pMD18-T全基因克隆表达载体为模板进行PCR扩增获得SLA-2-YT编码区基因片段,在上下游引物的5\'端分别添加限制性内切酶Xba Ⅰ和Not Ⅰ的酶切位点,将目的基因经pMD 19-T Simple Vector TA克隆后与pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro真核表达载体连接,获得的重组质粒转化至大肠杆菌Stbl 3感受态细胞,对扩大培养的单克隆菌株抽提质粒,使用双酶切和测序验证插入序列.对真核表达载体构建正确的菌株抽提无内毒素质粒,通过慢病毒包装和感染将质粒转染至sT2细胞,通过Western Blotting检测sT2细胞中SLA-2-YT基因的表达情况.结果显示,成功构建了SLA-2-YT/pCDH重组真核表达载体.重组质粒进行慢病毒包装和感染sT2细胞,经嘌呤霉素筛选后,成功获得阳性细胞克隆.Western Blotting检测显示SLA-2-YT/pCDH在sT2细胞中得到了优势表达,其融合蛋白的分子量大小为45 kD,与理论设计值相符.该实验成功构建了SLA-2-YT编码区基因的真核表达载体,并证实了SLA-2-YT编码区基因能够在sT2细胞中优势表达,为下一步开展SLA-2-YT递呈CTL表位的研究提供了材料.
其他文献
筇竹笋味甘鲜嫩,笋体脆爽,富含多种营养物质,具有重要的食用、经济和生态价值.筇竹笋采后生命力旺盛,笋体易老化腐烂,难以贮藏,而适当的低温贮藏可有效延缓其木质化进程,延长保鲜期.本文探讨了18、4、0和?18?℃?4种贮藏温度对筇竹笋色泽、硬度、失重率、呼吸强度、酶活性、MDA(丙二醛)、木质素及粗纤维的影响.结果表明:采后鲜笋在18?℃条件下贮藏4?d木质化严重,丧失食用价值;而在4、0和?18?℃条件下贮藏至第10?d,产品外观品质均保持较好,但由于冻藏(?18?℃)对笋体细胞造成损伤,解冻后其质地变软
赤潮给海洋生态环境和海水养殖业造成了严重危害,溶藻细菌是目前生物防治赤潮的有效手段之一.旨在探究从蓝细菌Cyanobacterium sp SCSIO-45682分离的4株共附生细菌中得到的一株对球形棕囊藻具有明显溶藻效应的微杆菌属菌株Microbacterium sp.CBA01的溶藻特性和初步的作用机理.采用细菌发酵液与棕囊藻共培养模式测定菌株CBA01的溶藻效应,并分别研究去除菌体、不同温度、不同pH条件下的溶藻特性,进一步测定藻细胞丙二醛(MDA)和抗氧化相关酶系统的响应规律.结果显示,菌株CBA
旨在探究Cr(Ⅵ)还原菌在Cr(Ⅵ)污染土壤中的修复条件及效果,为实际Cr(Ⅵ)污染农田土壤的修复提供借鉴.采用单因素实验、盆栽实验、高通量测序及qPCR等方法研究了菌株Microbacterium sp.BD6修复Cr(Ⅵ)污染土壤的最佳条件、修复前后对于植物的毒性以及对土壤中微生物群落的影响.实验表明菌株BD6在土壤含水率为30％及以上,温度为25-40℃的条件下,96 h对土壤中100 mg Cr(Ⅵ)/kg土壤的Cr(Ⅵ)还原率可达90％以上.菌株BD6在其它重金属离子存在的条件下仍然可以对Cr(
研究蛋白质磷酸酶2A调节亚单位Tap42p(type 2A associated protein-42kD)在酵母细胞壁应激反应中的作用.采用一步基因置换法构建TAP42基因缺失(tap42Δ)酵母菌株;观察在细胞壁应激反应条件下tap42Δ菌株的克隆形成能力;通过全自动生长曲线分析仪检测细胞分裂增殖活力;RT-PCR检测细胞壁应激反应通路中转录因子Swi4p、Swi6p、Ssd1p和Mpt5p的表达水平.在正常培养条件下,与野生型酵母细胞(BY4743)比较,tap42Δ菌株形成较小克隆,细胞增殖活力较
旨为研究2株微生物对Cr(Ⅵ)的还原能力及特性.在实验室条件下,通过连续培养,探究2株微生物的还原特性及pH、电子供体对其还原Cr(Ⅵ)影响,并结合表征手段研究寡养单胞菌对Cr(Ⅵ)的解毒机理.结果显示,寡养单胞菌和胶冻样芽孢杆菌对Cr(Ⅵ)的耐受性达400和200 mg/L,中性条件下,72 h内对45.5和18.5 mg/L的Cr(Ⅵ)去除率为100％;2株微生物在弱碱性条件下活性较强,在pH=8时,寡养单胞菌和胶冻样芽孢杆菌72 h内对50 mg/L的Cr(Ⅵ)去除率达98.1％和49.2％;寡养单
为探究新金色分枝杆菌代谢甾醇积累甾体药物中间体过程的中心代谢调节机制,采用转录组测序结合qRT-PCR技术,对比分析甾药中间体生产菌株中心代谢的关键基因转录水平,测定转化过程的葡萄糖消耗速率.结果显示,糖酵解途径的pfkB、pyk转录下调1.96倍及1.49倍;磷酸戊糖途径的zwf、gntZ转录下调3.57倍及2.43倍;三羧酸循环的citA、icd2和kdg转录分别下调2.5倍、1.78倍及1.92倍.对葡萄糖消耗速率的测定显示,中间体生产菌株的初始代谢速率显著低于野生型菌株.研究结果表明在转化甾醇积累
旨在利用原核表达系统实现重组鱼精蛋白的表达,并检测其生物学活性.利用基因工程手段将CYGB中甲硫氨酸位点ATG(除起始密码子)全部突变为ATC获得CYGBm.采用CYGBm与鱼精蛋白融合方法表达重组鱼精蛋白,CNBr裂解CYGBm与鱼精蛋白中的甲硫氨酸位点,并得以纯化.采用试管培养法分析重组鱼精蛋白抑菌活性,鲜虾检测其应用效果.CYGBm与鱼精蛋白融合可以在原核表达系统中大量以包涵体形式表达,经分离与CNBr裂解制备了纯化的重组鱼精蛋白,经验证重组鱼精蛋白具有很好的抑菌活性.采用基因工程方法可以实现具有抑
旨在探讨马尾松PmPT3基因在低磷胁迫条件下对拟南芥磷吸收利用的影响,实现林木优良基因的利用.通过构建马尾松PmPT3基因超表达载体pBWA(V)HS-PmPT3,采用花序浸染法遗传转化拟南芥.经筛选和检测,共获得4株T3代纯合株系;磷处理结果表明:超表达马尾松PmPT3基因显著提高了转基因拟南芥超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,分别是野生型植株的2.17倍、1.59倍、1.81倍;丙二醛(MDA)含量较野生型植株降低了47.58％.转基因拟南芥的地上部分和根部总