胃癌NCI-N87细胞中扩增子定位及其携带基因的初步筛查

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目的:在前期应用比较基因组杂交芯片发现胃癌NCI-N87细胞中存在扩增子的基础上,进一步确定胃癌NCI-N87细胞中扩增子的定位、扩增方式及所携带的基因,为胃癌的治疗提供依据。  方法:通过荧光原位杂交确认扩增子的定位和扩增方式,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测扩增子内所含基因的扩增、转录及表达水平,应用免疫组化技术分析候选基因与临床胃癌的相关性。  结果:确定胃癌NCI-N87细胞中扩增区域位于染色体上,其中扩增子1~3位于17号染色体,扩增子4异常定位于其他染色体;依据胃癌NCI-N87细胞三代测序找出扩增子之间的断点坐标,分析得到扩增子的扩增规律为反向串联重复序列,并依此规律绘制扩增子扩增方式的理论序列图;确定最高扩增区域(扩增子2)内高扩增、高转录及高表达的基因为CDK12、STARD3、MIEN1、PGAP3、ERBB2和GRB7;其中经本实验验证的CDK12、MIEN1和GRB7基因蛋白表达产物在临床胃癌中均表达上调,并与肠型胃癌和60岁及以上胃癌存在统计学差异,GRB7基因表达上调与胃癌浸润程度存在统计学差异。  结论:胃癌NCI-N87细胞扩增子1、2和3定位于17号染色体上,扩增子4异常定位,扩增方式均为均质染色区形式;其中最高扩增区域(扩增子2)内高扩增、高转录及高表达的基因为CDK12、STARD3、PGAP3、ERBB2、 GRB7和MIEN1;CDK12、GRB7和MIEN1基因表达上调与临床肠型胃癌及年长(60岁及以上)胃癌相关,GRB7基因表达上调与肿瘤浸润程度显著相关。
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