发酵法生产胞苷

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本课题以胞苷脱氨酶缺失枯草芽孢杆菌DOS7为出发菌株,通过紫外诱变和抗性筛选得到了具有5-氟胞苷(5FCR+)和2-杂氮尿嘧啶抗性(2AU+)遗传标记的目的突变株DOS7-2-1000-15,抗5-氟胞苷和2-杂氮尿嘧啶的临界浓度分别为800mg/L和1000mg/L。该菌株遗传稳定性较好,可稳定发酵,36℃发酵72h能积累胞苷最高为3.5g/L。 在摇瓶发酵水平,通过对种子不同培养条件,如pH、温度、装液量和最佳接种时间等的研究,得出最优种子培养条件:菌种在装液量为25ml、pH7.0的种子培养基中,36℃培养16h,以8%接种量转接于发酵培养基时,胞苷发酵单位提高到3.58g/L。 通过单因子和正交实验确定了胞苷发酵的最优培养基配方,同时通过单因素实验对胞苷发酵条件进行了优化,包括:发酵温度、发酵培养基初始pH和装液量,使胞苷发酵单位进一步提高到4g/L。 本文对间歇补料分批发酵方式进行了初步研究,发现葡萄糖初始浓度10%时,48h补加10%,72h补加5%的补料方式培养96h,胞苷发酵单位可达4.86g/L,培养到120h可达5.58 g/L,比未经补料分批发酵时提高了20%。
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