肌动蛋白是真核细胞骨架的主要成分,与细胞内的许多重要功能活动有关。近年来的研究表明,一些病毒在其感染过程中,与细胞内的肌动蛋白相互作用。这是病毒和宿主之间复杂的相互作用的重要体现,同时也说明肌动蛋白在病毒的感染过程中具有重要的作用。杆状病毒是一类大型环状双链DNA病毒,作为一种高效的生物杀虫剂、真核表达系统以及基因治疗载体的研究和应用,其分子生物学和侵染机制的研究也取得了很大进展。杆状病毒基础理论的研究不仅有助于对病毒自身的了解,而且为更好的利用杆状病毒提供了契机。像许多病毒一样,杆状病毒在昆虫细胞内复制过程中,也与肌动蛋白发生一系列的相互作用,如核衣壳的向核运输,基因组的表达和复制,子代核衣壳的装配,晚期多角体的形成等。本文首先对重组病毒AcMNPV-GFP-actin(ph~-)进行分析。实验发现表达的外源肌动蛋白并不影响病毒对Sf9细胞的感染性,但在感染晚期,受染细胞内肌动蛋白的分布出现明显变化,先从细胞质转运到核内,然后又从核内转运出来。为进一步研究肌动蛋白在杆状病毒感染晚期的作用,我们利用Bac-to-Bac系统构建了表达多角体基因、肌动蛋白与绿色荧光蛋白融合基因的重组病毒vAc-ph/70GA和vAc-ph/PGA,同时构建对照病毒vAc-ph。重组病毒vAc-ph/70GA感染Sf9细胞后能持续表达肌动蛋白,但不能形成多角体;vAc-ph则能形成多角体,说明所克隆的多角体基因是能够正常表达的。SDS-PAGE显示vAc-ph/70GA感染晚期,细胞内没有多角体蛋白的表达;而RT-PCR的结果进一步表明多角体基因的转录被抑制。肌动蛋白的表达并没有影响vAc-ph/70GA对细胞的感染力。本研究的结果表明,晚期持续表达的外源肌动蛋白抑制了多角体基因的转录和表达,从而导致多角体不能正常产生。 论文共分三部分:第一部分前言对杆状病毒作了概括性介绍,包括杆状病毒的分类命名、结构、复制周期、基因组复制和表达及其调控、杆状病毒的应用等,并重点介绍了本实验的研究背景,即杆状病毒与细胞肌动蛋白的相互作用和研究目的;第二部分介绍了本实验中应用的所有材料与方法;第三部分介绍了本实验研究的结果,以及我们对结果的讨论。