人rhoC基因原核表达载体的构建及其表达

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目的:构建人rhoC基因的原核表达载体,体外诱导表达GST-RhoC融合蛋白及表达产物的纯化。方法:从新鲜人直肠癌组织中提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR扩增目的片段,连接到pMD18-T载体。测序结果正确后,再连接到表达载体pET42,IPTG诱导GST-RhoC表达并用亲和层析方法纯化。结果:DNA测序结果证明用RT-PCR扩增得到了全长rhoC基因编码序列;经限制性内切酶酶切图谱分析证明rhoC被重组到表达载体中;用SDS-PAGE证明经IPTG诱导后在体外成功表达了GST-RhoC融合蛋白。结论:成功构建了人rhoC基因原核表达载体,并进行了体外表达。
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