干旱胁迫下不同品种牡丹生理生化变化及转录组的分析

来源 :河南科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rilinx_2009
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以牡丹品种‘洛阳红’和‘乌龙捧盛’为试材,采用盆栽控水法,对两种牡丹进行干旱与复水处理,研究了逐渐干旱和复水过程中抗氧化保护酶活性、渗透调节物质含量、MDA含量等牡丹生理生化特性及净光合速率(Pn)、气孔导度(Cond)、胞间CO2浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)和水分利用效率(WUE)等光合特性的动态变化;待处理组叶片出现永久萎蔫和复水后处理组叶片恢复至一定程度时,分别选取对照组、处理组合适叶片进行转录组测序与分析。为了确定适宜的盆栽牡丹叶片总RNA提取时期,以催花牡丹品种‘洛阳红’为试材,采用CTAB-LiCl改良法,对小风铃期、大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期、初开期和谢花期的牡丹叶片进行总RNA提取。利用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,紫外分光光度计检测RNA纯度。主要结果如下:1.干旱胁迫过程中,两种牡丹的SOD活性和CAT活性均呈先上升后下降趋势,两种牡丹的POD活性均呈逐渐上升趋势。复水后,相对于对照,‘乌龙捧盛’SOD活性升高,且差异达显著水平,两种牡丹POD活性变化均不显著,‘乌龙捧盛’CAT活性升高,且差异达显著水平。相关性分析表明,‘洛阳红’SOD与POD、SOD与CAT间存在显著或极显著正相关;‘乌龙捧盛’SOD与POD间存在显著正相关。2.随着水分胁迫程度的增加,两种牡丹的可溶性蛋白含量呈先升高后降低的趋势;两种牡丹的可溶性糖、脯氨酸和MDA含量均呈逐渐升高的趋势。相比于重度干旱胁迫,复水后两种牡丹的渗透调节物质含量均有所降低,除‘乌龙捧盛’可溶性蛋白差异不显著外,其他指标差异均达显著水平;而相对对照,复水后两种牡丹的渗透调节物质含量升高,但差异均不显著。两种牡丹的MDA含量在复水后比重度干旱胁迫时有所降低,差异均达显著水平;而与对照进行比较,差异不显著。3.随着水分胁迫程度的增加,两种牡丹的净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度、蒸腾速率和水分利用效率均呈逐渐下降的趋势;复水后,相对重度干旱胁迫,均有所上升,而与对照进行比较,均有所下降,然而有些指标恢复到对照水平;两个品种比较显示,在不同水分处理时,‘洛阳红’净光合速率和水分利用效率均高于‘乌龙捧盛’,表明‘洛阳红’的耐旱性可能更强。4.七个时期提取的总RNA,电泳均检测到28S、18S和5S rRNA条带,吸光度比值A260nm/A280nm均介于1.8~2.0之间,其中大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期和初开期的rRNA条带整齐清晰,并且28S rRNA亮度高于18S rRNA。上述表明CTAB-LiCl改良法适合从牡丹叶片中提取总RNA,且大风铃期、圆桃期、平桃期、破绽期和初开期是最适合提取总RNA的五个时期。5.对6组牡丹叶片样品转录组进行转录组测序,每个样品的Clean reads的总数均达到了51M以上,序列组装共获得Unigene81725个。所有Unigene长度均大于200bp,长度在201~300bp范围的Unigene所占比例最大,为30.00%。利用NR、NT、Swiss-Prot、KEGG、COG和GO6个数据库对得到的81725个Unigene进行Blast比对,比对结果显示,53.81%(43977个)的Unigene有功能注释,其中,51.24%(41876个)的Unigene与NR蛋白数据库有同源比对信息。6组样品两两比较,差异表达基因数目处于5500至22000之间,差异表达基因最少为WLPS-WT与WLPS-RE的比较,最多为LYH-WT和WLPS-DR的比较。
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