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目的:
1.监测盐酸博安霉素原位凝胶在体内的扩散情况以评价原位凝胶对盐酸博安霉素(BAM)的阻滞作用;
2.观察盐酸博安霉素原位凝胶经皮瘤周注射间质化疗治疗裸鼠人肝癌移植瘤的抗肿瘤效应。
方法:
1.以荧光染料异硫氰酸荧光素(FITC)标记BAM,制备异硫氰酸荧光素-盐酸博安霉素(FITC-BAM)偶联物,对偶联物进行分离纯化,利用基质辅助激光解析电离/飞行时间(MALDI-TOF)质谱检测偶联效果。建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,应用动物体内活体成像系统定时监测FITC-BAM在裸鼠体内的动态分布情况。
2.建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,选取肿瘤直径约为5mm的裸鼠24只,分为生理盐水组、空白原位凝胶组、盐酸博安霉素溶液组、盐酸博安霉素原位凝胶组,瘤结周围皮下注射相应药物。定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并称重,治疗结束后常规超声评价肿瘤大小、内部回声及血流情况。光学显微镜下观察肿瘤组织坏死情况,透射电镜观察肿瘤组织超微结构的改变。
结果:
1.MALDI-TOF质谱检测显示,FITC和BAM偶联后分子峰1884和2273,且二者偶联的分子比主要为1:1或2:1。活体动物成像系统观察FITC-BAM在裸鼠体内的动态分布情况,活体动物成像系统观察显示,盐酸博安霉素原位凝胶组FITC-BAM的扩散较溶液组明显延迟。
2.盐酸博安霉素原位凝胶瘤周注射间质化疗肿瘤抑瘤率达87.75%。超声显示:实验结束后,生理盐水组和空白原位凝胶组人肝癌Hep-G2裸鼠移植瘤的肿瘤组织内部可见回声不均匀的混合回声结节,内部及周边血流丰富,盐酸博安霉素溶液组肿瘤内可见点状高回声及小片状无回声区,内部及周边可见星点状血流,而盐酸博安霉素原位凝胶组较其他各组肿瘤体积明显缩小,内部可见大片状无回声区,内部及周边几乎未见血流信号。光学显微镜和透射电镜观察结果提示:盐酸博安霉素原位凝胶组肿瘤组织大片坏死,该组的凋亡细胞多见,且部分细胞出现溶解。
结论:将BAM制备成原位凝胶制剂,能够阻滞药物在体内的释放,延长作用时间,疗效优于普通盐酸博安霉素溶液,使用安全。