实验目的：　　研究汉防己甲素对人骨肉瘤细胞 143B 增殖的抑制作用及其与PTEN信号通路间的关系。　　试验方法：　　采用CCK-8、结晶紫、流式细胞术、Western blot、RT-PCR、H&E染色、免疫组织化学染色等技术;研究汉防己甲素抑制人骨肉瘤细胞143B增殖与PTEN的关系。具体方法如下：　　（1）以CCK-8、结晶紫检测汉防己甲素对143B细胞增殖的影响;　　以流式细胞术检测汉防己甲素对 143B 细胞周期、凋亡的影响;以Western blot技术检测汉防己甲素对143B细胞增殖、凋亡信号分子的影响;　　（2）以裸鼠体内异位成瘤模型、H&E染色、免疫组织化学染色技　　术等方法检测汉防己甲素在体内实验中对 143B 细胞增殖、凋亡的影响;　　（3）利用 RT-PCR 技术检测汉防己甲素对 143B 细胞 PTEN 在4　　mRNA水平的表达的影响;　　（4）以 Western blot、免疫组织化学染色技术检测汉防己甲素对　　143B细胞PTEN的表达的影响;　　（5）利用CCK-8、结晶紫、流式细胞术;检测过表达或沉默PTEN　　对汉防己甲素抑制143B细胞增殖的影响;　　（6）以CCK-8、结晶紫等方法检测p38 MAPK抑制剂对汉防己甲　　素抗肿瘤作用的影响;用Western blot检测p38 MAPK抑制剂和汉防己甲素对PTEN表达量的影响。　　实验结果：　　(1)汉防己甲素通过诱导 G1 期细胞周期阻滞来抑制 143B 细胞增殖;通过诱导凋亡因子来促进其凋亡;　　(2)汉防己甲素抑制体内骨肉瘤的生长;诱导肿瘤凋亡;　　(3)汉防己甲素对143B细胞内PTEN在mRNA水平的表达无明显影响;　　(4)汉防己甲素能显著的促进143B细胞内PTEN的蛋白表达;并抑制其磷酸化修饰;　　(5)过表达PTEN增强汉防己甲素对143B细胞的增殖抑制作用;沉默PTEN部分缓解汉防己甲素对143B细胞的增殖抑制作用;　　(6)汉防己甲素促进143B细胞内p38 MAPK的磷酸化;p38 MAPK抑制剂减弱汉防己甲素对 143B 细胞的增殖抑制作用;p38重庆医科大学硕士研究生学位论文　　MAPK抑制剂可以提高PTEN的磷酸化水平。　　实验结论：　　汉防己甲素可以抑制143B细胞增殖;诱导其凋亡。且该作用可与p38 MAPK-PTEN通路密切相关。