论文部分内容阅读
本实验从华南农业大学校园采集的一株生长旺盛的大黍(Panicum maximum)进行了内生固氮菌的分离，采用乙炔还原法鉴定其固氮活性，得到36株菌，通过SDS-PAGE全细胞蛋白电泳和IS-PCR进行聚类分析，从各类中选出一株代表菌株做16SrDNA全序列测定，并在GenBank上比对，构建系统发育树，以进一步确定其分类地位，再测定其生理生化特性，在不同的温度，PH，渗透压，铵根离子存在下的固氮特性。
1.内生固氮菌的筛选：将采集得来的大黍用DN，SM无氮选择培养基筛选得内生固氮菌36株，其中根部31株，茎部5株．活性最高的为D31，活性为750 nmol C2H2/mL·h，最低的为D27，40 nmol C2H2/mL·h。
2.聚类分析：通过SDS-PAGE全细胞蛋白电泳和IS-PCR，将分离得的菌株分为5大类，各类的蛋白电泳和IS-PCR分类结果一致，在此基础上，从各类中挑选出5株代表菌株，采用Biolog板测定5株代表菌株的碳源利用能力，其中D36利用谱最广，D8最少。
3.从代表菌株中选出D36、D7、D26扩增其16S rDNA并测序，将得到的序列在GenBank中搜索，分别得到以下各最相似性菌株：D26与Enterobacter cloacae subsp。dissolvens相似性达96％，D7与Pantoea dispersa相似性达97％，D36与Pseudomonas相似性98％，鉴于16S rDNA的高度保守性，因此认为此三株代表菌株分别最有可能为阴沟肠杆菌，分散泛菌，假单孢杆菌。
4.固氮特性测定：在pH2.8、3.8、5.8、7.0、8.5、10.1、11.5下各菌均能生长，5株供试固氮菌在中偏碱性范围内表现最适固氮活性，D36在这一范围内固氮活性上升剧烈，在pH8.5时表现出最高固氮活性，其余菌株固氮活性随着pH上升固氮活性上升和缓，表现出较大固氮适应性。在0.01％、0.25％、0.5％、1％、2％、4％、12％NaCl浓度下，各菌株有一最适渗透压浓度，在此浓度前活性随NaCl浓度上升渐升，在此浓度后，活性下降，最适渗透压为0.5％—4％。在0、0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L NH4+浓度下的固氮活性，5个代表菌株在低浓度下有固氮活性，随着浓度增高活性下降。供试菌株在45h左右固氮活性增量达到最大。