【摘 要】
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为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap (V2C)基因,将其插入pEP
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州310021;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州,310021;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国
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为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap (V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-△gE和pPRV-△gE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-△gE和rPRV-△gE.Western blot分析表明rPRV-V2C-△gE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64ku和28 ku两个片段.重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C- △gE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖.本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础.
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