【摘 要】
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目的 明确癌基因B-RafV600E在Mpsl和B-RafWT/MEK/ERK通路之间自动调节的负反馈回路中抵抗作用的具体机制.方法 (1) Sbcl2转染B-RafWT和Mps l-KD,Western blot方法检测p-ERK水
【机 构】
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山西医科大学基础医学院,太原,030001;山西医科大学第一临床医学院普通外科,太原,030001
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目的 明确癌基因B-RafV600E在Mpsl和B-RafWT/MEK/ERK通路之间自动调节的负反馈回路中抵抗作用的具体机制.方法 (1) Sbcl2转染B-RafWT和Mps l-KD,Western blot方法检测p-ERK水平;(2)向B-Raf野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞及V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中过表达Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;(3)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低AKT,转染Mps1,Westemblot方法检测p-ERK水平;(4)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低内源性B-Raf,过表达外源性RafV600E,Western blot方法检测p-AKT水平;敲低SK-MEL-28、A375细胞中RafV600E,Western blot方法检测p-AKT水平.结果 (1)Mps1激酶和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性;(2)在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中外源性Mps1的表达可诱导AKT磷酸化,抑制ERK活性;V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中外源性Mps1的表达不能诱导AKT磷酸化,亦不影响ERK活性.(3)敲低野生型黑色素瘤细胞中的AKT后,Mps1和B-RafWT/MEK/ERK之间的负反馈作用消失.(4)癌基因B-RafV600E通过抑制AKT的磷酸化,进而抵抗Mps1激酶与B-Raf/MEK/ERK通路之间的负反馈调节作用.结论 Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps 1激酶的活性,且癌基因B-RafV600E对B-Raf/MEK/ERK/Mps1负反馈通路的抵抗作用是通过抑制AKT的磷酸化实现的.
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