MCP-1诱导人脐静脉内皮细胞株凋亡的途径

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目的:研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的途径。方法:1.培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;2.不同浓度的MCP-1(0.1ng/mL,1.0ng/mL,10ng/mL,100ng/mL)作用hVECs48h后,NAO染色流式细胞术检测线粒体质量;流式细胞术检测细胞色素C(Cyt C)含量变化;Western blot检测Caspase-9蛋白的表达;3.用不同浓度MCP-1(0.1ng/mL,1.0ng/mL,10ng/mL,100ng/mL)作用细胞48h,Real-time PCR检测细胞P53mRNA表达量;Westernblot检测p53蛋白的表达;用不同剂量(10μ mol/L,20μ mol/L,30μ mol/L)的P53阻断剂PFT-α预处理细胞后,再用10ng/mL的MCP-1诱导hVECs,AnnexinV-FITC/PI双染细胞流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:1.成功培养了人脐静脉内皮细胞,经免疫荧光法鉴定为内皮细胞。2.用不同浓度MCP-1作用hVECs48h,随着MCP-1剂量的增加线粒体质量逐渐降低;细胞浆内Cyt C含量逐渐增加;Caspase-9蛋白的表达增强。3.不同浓度的MCP-1均可诱导人脐静脉内皮细胞p53 mRNA及蛋白的表达,且与其浓度呈剂量依赖关系;4.30μ mol/L PFT-α能抑制MCP-1诱导的内皮细胞凋亡。结论:MCP-1通过线粒体途径诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,p53信号通路参与了这一细胞凋亡事件。
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