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目的:观察复方瑞康欣(Compound Ruikangxin,CR)对吗啡依赖戒断大鼠焦虑行为及海马、杏仁核和伏核突触形态结构可塑性的影响。
方法:健康雄性SD大鼠84只,随机分为生理盐水(NS)对照组、吗啡戒断焦虑模型组(模型组)、丁螺环酮组(Bus组)、CR高、中、低剂量共6组,NS对照和模型组为18只,余每组均为12只。各组大鼠(NS对照组除外)均行颈背部皮下注射(sc)吗啡10天、剂量递增法建立大鼠吗啡依赖戒断焦虑模型;NS对照组大鼠除给予等量NS替代吗啡外,其余处理皆同上。在吗啡自然戒断的1-3 d,CR高、中、低剂量和丁螺环酮组分别用CR300、200、100mg/kg和Busl5 mg/kg灌胃治疗(2次/日),模型组、NS对照组用等量NS灌胃治疗。于末次吗啡注射后72h,高架十字迷宫实验评价大鼠的焦虑行为,检测各组大鼠进入开放臂次数的百分比(OE%)和在开放臂停留时间的百分比(OT%)数据。在确认吗啡戒断焦虑模型建立成功后,每组各取6只大鼠,分离其海马、杏仁核和伏核组织进行常规电镜样品制备,透射电镜观察并电脑采集图片,采用体视学方法比较各组突触的数密度(Nv)、面密度(Sv)、突触连接带平均面积(S);LEICA细胞图象分析系统比较各组突触的突触后致密物厚度、突触间隙宽度、突触活性区长度和突触界面曲率数据。每组剩余之6只大鼠,取海马脑组织制作石蜡切片,按突触素检测试剂盒说明操作,采用亲和素-生物素复合物法进行染色,检测各组大鼠海马突触素的表达。
结果:
1.行为学
与模型组比较,CR300、200 mg/kg和Bus治疗组能明显增加大鼠进入开放臂次数的百分比(OE%)(P<0.01)和在开放臂停留时间的百分比(OT%)(P<0.05)数值。
2.突触体视学
2.1海马:在CA1、CA3区,与NS对照组比较,模型组突触的Nv、Sv显著增复方瑞康欣对吗啡戒断大鼠焦虑行为及海马、杏仁核和伏核突触形态结构可塑性的影响高(P<0.01)、S显著降低(P<0.01);与模型组比较,CR高、中剂量和Bus组的Nv和Sv显著降低(P<0.01),S增高(P<0.05或0.01)。
2.2杏仁核:与NS对照组比较,模型组突触的Nv、Sv显著增高(P<0.01),S显著降低(P<0.01);与模型组比较,CR高、中剂量和Bus组Nv和Sv显著降低(P<0.01),S增高(P<0.01或0.05)。
2.3伏核:与NS对照组比较,模型组突触的Nv显著增高(P<0.01);与模型组比较,CR高、中剂量和Bus组Nv显著降低(P<0.01)。Sv、S在6组间比较均无统计学差异(P>0.05)。
3.突触界面结构参数
3.1海马:在CA1、CA3区,与NS对照组比较,模型组突触的突触后致密物厚度、活性区长度、间隙宽度、界面曲率均增加(:P<0.01或0.05):与模型组比较,CR高、中剂量和Bus组的上述四个参数值均降低(P<0.0或0.05)。
3.2杏仁核:突触界面结构各参数在6组间比较均无统计学差异(P>0.05)。
3.3伏核:结果同杏仁核。
4.突触素表达
在海马CA1、CA3区,与NS对照组比较,模型组突触素平均积分光密度值(OD值)显著增高(P<0.01);与模型组比较,CR高、中剂量和Bus组的突触素平均OD值明显降低(P<0.01)。
结论:
1、CR具有明显减轻吗啡戒断所引起的焦虑,其作用强度与经典抗焦虑剂丁螺环酮相似。
2、通过逆转吗啡戒断时海马、杏仁核和伏核突触形态结构的可塑性变化,可能是CR临床治疗吗啡戒断焦虑/稽延性戒断症状的机制之一。