目的将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)编码基因与EB病毒(EBV)即刻早期基因(BZLF1)进行融合,构建融合基因的重组腺病毒表达载体,旨在发挥融合基因编码产物GM-SCF增强抗肿瘤免疫,以及BZLF1诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,为协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞提供实验基础和理论依据。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得目的基因GM-CSF和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(spliced overlap extension, SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser) 3的DNA编码序列进行连接,构建融合基因BZGM。将融合基因BZGM定向亚克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因BZGM真核表达载体pAd-BZGM。经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-BZGM。RT-PCR和Western blotting鉴定重组腺病毒感染人鼻咽癌CNE细胞的情况；MTT法检测腺病毒感染CNE后细胞的增殖情况。结果①将目的基因GM-CSF和BZLF1构建成融合基因BZGM。②构建融合基因BZGM重组腺病毒表达载体pAd-BZGM,测序鉴定结果表明序列正确无误。③将真核表达载体pAd-BZGM转染293细胞,包装获得重组腺病毒vAd-BZGM。④Western blotting和RT-PCR结果显示重组腺病毒感染的CNE细胞可检测到融合基因和EBV早期基因BMRF1表达,表明该融合基因能够诱导病毒从潜伏期进入裂解增殖期。⑤MTT法检测显示重组腺病毒感染CNE细胞后抑制细胞增殖的作用与所设对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)结论成功构建了GM-CSF和BZLF1融合基因BZGM重组腺病毒表达载体,并在293细胞中包装获得重组腺病毒vAd-BZGM,重组腺病毒vAd-BZGM可在靶细胞内稳定表达目的基因,可有效诱导潜伏状态EBV进入裂解期复制,进而抑制细胞的增殖,为进一步探讨BZGM的功能奠定了实验基础。