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本文利用RT-PCR和RACE的方法从黑鲷卵巢中克隆了芳香化酶基因。该基因全长为1836bp,开放阅读框为1560bp,编码一个由519个氨基酸残基组成的蛋白质。氨基酸序列同源性分析表明,该氨基酸序列与其他硬骨鱼类芳香化酶具有较高的同源性,同源性在63~94﹪之间。
本文通过RT-PCR的方法检测了芳香化酶基因在黑鲷大脑、心脏、肝、肌肉、肠等8种组织中的表达。结果表明芳香化酶基因在卵巢中高表达,在大脑和精巢中表达较弱。通过半定量RT-PCR检测了芳香化酶基因在1,2和5龄黑鲷卵巢和精巢组织中的表达情况。利用RT-PCR和3′-RACE的方法从黑鲷精巢中克隆了DMRT1基因cDNA的部分序列。通过RT-PCR的方法检测了DMRT1基因在黑鲷大脑、心脏、肝、肌肉、肠等8种组织中的表达。结果表明DMRT1基因只在精巢中表达,在其他7种组织中则未检测到DMRT1基因的表达。
通过半定量RT-PCR检测了DMRT1基因在1,2和5龄黑鲷精巢组织中的表达情况。结果显示DMRT1基因在这三种性别类型黑鲷精巢组织中的表达水平没有显著的差异。这一结果表明在鱼类成体的精巢中,DMRT1的表达量可能不会因精巢结构或生理状态的改变而发生改变,而始终维持一定量的表达。
利用RT-PCR和RACE的方法从黑鲷精巢中克隆出两个FTZ-F1基因,asff1a和asff1b。asff1acDNA序列总长度为1562bp,含编码起始密码子ATG,推导出520个氨基酸残基;asff1bcDNA序列总长度为1394bp,含编码起始密码子ATG,推导出464个氨基酸残基。利用PAUP4.0软件了构建asff1a和asff1b与其他动物FTZ-F1基因氨基酸序列的NJ树。在树中asff1a被归于NR5A2亚群,但asff1b既没被归于NR5A2亚群,也没被归于NR5A1亚群,而是与青鳉mdFTZ-F1,尼罗罗非鱼tAd4BP/SF-1和斑马鱼zff1b一起,构成了一个新的亚群,NR5A4。通过RT-PCR的方法检测了asff1a与asff1b在黑鲷大脑、心脏、肝、肌肉、肠等8种组织中的表达。结果显示asff1a在大脑、肝、肠、肾脏、精巢和卵巢中表达,在心脏和肌肉中未检测到表达;asff1b在大脑、肾脏、精巢和卵巢中表达,在心脏、肝、肌肉和肠中未检测到表达。