弓形虫LDH-like MDH基因的克隆、表达、亚细胞定位和定点突变研究

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本研究首次克隆了T.gondiiMDH的DNA序列、cDNA序列,对cDNA推导翻译出的氨基酸序列进行了一系列生物信息学分析,T.gondiiMDH确切命名应为T.gondiiLDH-LikeMDH,进化上T.gondiiMDH所处位置衍生于α-原细菌或营光合作用细菌MDH的进化分支,与α-原细菌或营光合作用细菌MDH也隶属LDH-LikeMDH相吻合。T.gondiiMDH在原核生物和真核细胞内能分别进行有效的融合表达和非融合表达。间接定位试验表明T.gondiiMDH为胞浆定位。T.gondiiMDH-R89P突变体酶活性降低,Km值增大。T.gondiiMDH-H176L突变体酶活性几乎为零。T.gondiiMDH与多数真核生物MDH尤其是和人各型MDH之间的异源性和低同源性(与人胞浆型MDH、线粒体型MDH、NADP+依赖型MDH的同源性分别为20.9%、25.9%、18.7%),提示基于MDH作为药靶筛选抗T.gondii药具有可行性。另外本研究也为进一步深入研究T.gondiiMDH奠定了基础。
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