论文部分内容阅读
本实验应用免疫印迹(western blot)技术，研究低浓度腺苷类似物环己基腺苷(CHA)，对肾脏髓袢升支粗段PKA、PKC亚型(PKCε)、PLA2蛋白质表达和磷酸化水平的影响，进一步揭示肾脏髓袢升支粗段的信号转导机制。
方法：急性分离肾脏髓袢升支粗段，应用免疫印迹(western blot)技术，检测肾脏髓袢升支粗段各蛋白激酶的表达及关系。
结果表明：
1、在肾脏髓袢升支粗段中加入CHA后，观察PKA、PLA2及PKCε作用不同的时间(15min，30min，1h，2h)下的改变，实验表明CHA在不同的时间点与对照组相比均不能明显改变肾脏髓袢升支粗段PKA，PLA2及PKCε的蛋白表达(p>0.05，n=3)。
2、在肾脏髓袢升支粗段中加入CHA后，观察P-PKA、P-PLA2及P-PKCε分别作用不同的时间(15min，30min，1h，2h)下的改变，实验表明CHA可明显降低肾脏髓袢升支粗段的PKA的磷酸化水平，明显增加PKC亚型(PKCε)的磷酸化水平，对PLA2的磷酸化水平没有明显影响。而且对P-PKA及P-PKC亚型(PKCε)的影响在30min时最明显(p<0.05，n=3)。
3、在肾脏髓袢升支粗段中分别加入A1受体阻断剂DPCPX作用30min.，A1受体阻断剂DPCPX作用30min后再加入CHA(200nmol/L)作用30min，A2a受体阻断剂CSC作用30min，A2a受体阻断剂CSC作用30min后再加入CHA(200nmol/L)30min，A2b受体阻断剂MRS-1754作用30min，MRS-1754作用30min后再加入CHA30min，观察P-PKA改变，结果显示，CHA抑制P-PKA的蛋白表达是通过A2b受体发挥作用的(p<0.05，n=3)。
4、在肾脏髓袢升支粗段中分别加入A1受体阻断剂DPCPX作用30min.，A1受体阻断剂DPCPX作用30min后再加入CHA(200nmol/L)作用30min，A2a受体阻断剂CSC作用30min，A2a受体阻断剂CSC作用30min后再加入CHA(200nmol/L)30min，A2b受体阻断剂MRS-1754作用30min，MRS-1754作用30min后再加入CHA30min，观察P-PKCε改变，结果显示，CHA增加P-PKCε的蛋白表达是通过A2b受体发挥作用的(p<0.05，n=3)。
结论：CHA降低肾脏髓袢升支粗段的P-PKA磷酸化水平，而增加肾脏髓袢升支粗段P-PKCε的磷酸化水平是通过A2b受体发挥作用的。