蒜头果蛋白质Ⅱ的分离纯化、结构鉴定及生物活性测定

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蒜头果中文名蒜头果,拉丁名MalaniaOleiferaChunetLee,中文科名铁青树科,拉丁科名Olacaceae,又名蒜头木、马兰后(壮语音),是我国的稀有树种,已被定为重点保护的濒危物种,二级保护树种。 本文对蒜头果蛋白质Ⅱ的分离纯化、部分结构鉴定和生物活性测定进行了研究。其实验方法是将蒜头果种仁经匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、疏水柱层析、离子交换柱层析等步骤得到一新蛋白质,命名为蒜头果蛋白质Ⅱ。非变性PAGE电泳显示单一条带,SDS-PAGE电泳显示出A、B两条带,说明蒜头果蛋白质Ⅱ是由亚基A、B两条链通过非共价键连接而成的;加巯基乙醇将蒜头果蛋白Ⅱ还原后,SDS-PAGE电泳检测则呈现四条带:其中A链裂解为A1、A2和A3三条链,而B链没有变化。此结果表明蒜头果蛋白质Ⅱ中A链由A1、A2和A3三条链通过共价键结合而成。同时该蛋白质经SDS-PAGE电泳检测,知蒜头果蛋白质H的表观分子量为80kD左右,A链为45kD,B链为30kD左右。将B链和A链经还原裂解后的A1链两条链经转膜测序,得A1链N-末端部分氨基酸序列为:NH2-G-L-E-E-A(V)-S()-X-T-A-K;B链N-末端部分氨基酸序列为:S(H)-Q(TEP)-T-Q(EPL)-Q-S-Q(TY)-E(LG)-Q(K)-Q(PL)。检索NCBI-BLAST知该蛋白A1链N-末端的序列没有完全相同的。 实验进一步对蒜头果蛋白Ⅱ的生物活性进行研究。本实验采用了MTT比色法检测其对Hela细胞(人宫颈癌细胞)的抑制作用,测得其IC50(半抑制浓度)值为7.7×10-8mol/L。可见该蒜头果蛋白质可作为抗癌药物筛选的作用靶点,对于新一代抗肿瘤药物的研发具有潜在价值。
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