甜菜夜蛾核型多角体病毒IE1在哺乳动物细胞中的功能分析

来源 :中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:white2008
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本论文分为四章。   第一章,为前言综述,首先对昆虫杆状病毒进行了概述,主要介绍了杆状病毒的生物学特征,杆状病毒的形态与结构,杆状病毒的侵染与增殖过程以及杆状病毒的复制与基因表达。随后总结了杆状病毒的主要应用,包括作为生物防治的杀虫剂,作为多功能的蛋白表达载体以及基因治疗载体等方面的进展。然后介绍了本课题所研究的杆状病毒IE1的研究进展。最后以VP16为例,简要介绍了几种研究最为广泛的病毒反式激活蛋白。   第二章,通过PCR扩增甜菜夜蛾核型多角体病毒US株的iel基因,将该基因连接到pGEX-KG载体中并在大肠杆菌中对其进行了克隆和表达,Western blot鉴定条带大小正确,同时有较小的表达条带,可能在表达中降解。大量诱导并纯化后,进一步证明了目的蛋白的表达,但没有获得大量的目的蛋白,可能原因是蛋白本身表达量较小,并且存在降解现象。   第三章,在本文中,在人肾胚293细胞(HEK293)中表达了绿色荧光蛋白融合的SeMNPV IE1(GFP-IE1)。共聚焦图片显示该融合蛋白定位于293细胞的细胞核内。之后,AcMNPV的gp64启动子,SeMNPV F蛋白启动子以及果蝇hsp70启动子分别被用来分析SeMNPV IE1的功能。结果发现在hr序列不存在的条件下,IE1能明显增强F蛋白的启动子的表达,而对gp64启动子活性没有明显影响,IE1对hsp70启动子也有一定的激活作用。在hr序列存在情况下即hr序列与启动子序列顺式连接时,IE1对各启动子的作用以及IE1在甜菜夜蛾细胞系中的定位还需进一步分析。   第四章,之前实验对多种基因的测序发现,甜菜夜蛾核型多角体病毒US株和Z株的基因差异并不明显,本文对iel基因进行了PCR检测,在Z株中没有扩增到相应的条带;同时对两株病毒基因组进行了多个限制性内切酶的单酶切鉴定,也没有发现明显的条带差异;本实验室正在使用PCR方法,通过克隆hr1序列来比较两株病毒的基因型差异。
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