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虾青素(虾青素 astaxanthin,虾青素)是一种来自于藻类和水产动物的类胡萝卜素,具有较强的抗炎和抗氧化活性。本文以雨生红球藻粉和其提取物虾青素为原料,采用模型动物作为研究对象,观察讨虾青素的预防子痫前期效果,并利用脐静脉内皮细胞(HUVEC)研究其抗氧化作用机制。 采用 L-亚硝酸左旋精氨酸甲酯(L-NAME)诱导产生子痫前期孕鼠,随机分为空白组(n=20)、L-NAME建模组(n=20)和雨生红球藻组(n=20)。受孕D5,雨生红球藻组大鼠灌胃1.6g/ kg·bw·d雨生红球藻;D10建模组和雨生红球藻组每天皮下注射L-NAME125 mg/kg·bw·d。检测血液中MDA、SOD、NOS;HE和Masson染色分析胎盘组织病理改变;免疫组化分析 NF-κB(nuclear factor kappa B)、ROCK II(Rho-associated protein kinase II)、HO-1(heme oxygenase)、caspase3蛋白表达变化。结果显示,L-NAME诱导大鼠产生典型的子痫前期症状,如血压、尿蛋白增高;血液中的MDA、内皮素(endothelin,ET)增高,SOD下降等。而经雨生红球藻处理后,大鼠血压显著降低,尿蛋白减少,血液中的MDA和内皮素下降,SOD升高,同时雨生红球藻明显下调了胎盘组织中的NF-κB、ROCK II、caspase3,增加了HO-1的表达。胎盘组织中的滋养细胞数减少,纤维蛋白沉积减少,基底膜增厚现象改善。 采用 L-NAME诱导建立大鼠子痫前期疾病模型。实验分为3个组:对照组,L-NAME组、虾青素组,每组10只。在妊娠第5天开始灌胃25 mg/kg·d·bw的虾青素,连续灌胃20天;从妊娠第10天时,L-NAME组和虾青素组腹腔注射 L-NAME125 mg/kg·d·bw,妊娠18天时检测大鼠的血压,收集尿液并检测尿蛋白;在第21天时股动脉取血并处死大鼠;检测血清中的MDA、SOD、NOS、NO;HE分析胎盘组织改变情况;采用免疫组化技术检测 NF-κB(nuclear factor kappa B)、ROCK II(Rho-associated protein kinase II)、HO-1(heme oxygenase)和 Caspase3的表达。结果表明,经L-NAME诱导后孕鼠产生典型的子痫前期症状如血压和尿蛋白升高等;L-NAME组的血液中 MDA增高,NOS、SOD活性下降等。而经虾青素处理后,子痫前期大鼠血压显著降低,尿蛋白减少,血清中 MDA含量显著下降,SOD活性明显增加(P<0.05),NO升高,病变现象得到改善;且胎盘组织中 NF-κB、Caspase3(P<0.05)及 ROCK II的表达量降低、HO-1的表达增加。 体外培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为空白组、模型组(H2O22mmol/L)、虾青素+H2O2(0.1、1、10μmol/L虾青素预处理48h后加2mmol/L H2O2处理1h)组。MTT法检测细胞的存活率;DCFH-DA法检测细胞内 ROS水平;JC-1法检测线粒体膜电位;Annexin V-FITC流式细胞术和 DAPI法检测细胞凋亡;western blot法检测才 caspase-3和 p53蛋白表达。结果:与空白组相比,H2O2能明显造成HUVEC细胞的凋亡和坏死。虾青素可以降低 H2O2引起的细胞死亡,减少活性氧的产生,使线粒体膜电位升高,凋亡率减少,caspase-3和p53的表达下调。结论: 本研究表明,雨生红球藻及其提取物虾青素能够能有效降低子痫前期孕鼠和结肠小鼠的氧化应激损伤及病理组织改变,推测其可能通过清除氧自由基而减少氧化损伤,其机制可能与保护线粒体功能有关。