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目的: CD40(cluster of differentiation40)被认为是动脉粥样硬化(AS)斑块发生发展的重要因素,尤其在进展期斑块。然而,慢病毒介导的CD40小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对AS进展期斑块的发展和稳定作用不详。本实验研究目的是通过阻断CD40信号传导,观察慢病毒介导的CD40 RNA干扰能否阻止AS斑块的进展。
方法:建立重组CD40目的基因RNA干扰慢病毒载体(CD40-RNAi-LV)和阴性对照-绿色荧光蛋白-慢病毒载体(NC-GFP-LV)。10周龄载脂蛋白E缺陷(ApoE-／-)小鼠,随机分为CD40-RNAi-LV治疗组和NC-GFP-LV对照组。通过颈动脉外周放置硅胶圈促使AS斑块形成,硅胶圈植入后的2、4、6周分别测定硅胶圈所在部位血管的内膜厚度。8周后拆除硅胶圈,分别将10μL1.0×1.08TU／mL的CD40-RNAi-LV和NC-GFP-LV病毒液通过颈外动脉注入治疗组和对照组的颈总动脉。右颈动脉标本行H&E染色和Masson三色染色,行冰冻切片在荧光显微镜下观察GFP表达,其余标本用CD40抗体行免疫组化染色。通过H&E染色计算斑块内膜表面积、内膜／中膜比率、内膜／管腔比率。实时定量PCR(RT-PCR)检测斑块内CD40mRNA的表达水平。
结果:慢病毒治疗对小鼠体重没有影响。检测斑块GFP表达,显示转染一周后可见GFP表达,两周后增多,四周后仍可见GFP。CD40-RNAi-LV转染六周后不仅阻止斑块进展,而且增加斑块的胶原含量,表现为内膜／中膜比率明显降低(0.31±0.04 versus0.68±0.05,P<0.05),管腔狭窄减轻(内膜／管腔比率,0.17±0.04 versus0.33±0.40,P<0.05)。同时,RT-PCR分析CD40-RNAi-LV组CD40 mRNA表达水平下调。
结论:慢病毒介导的CD40小干扰RNA基因沉默技术有抑制斑块进展和增加斑块胶原含量的作用,可望成为AS治疗的一种新的策略。