肺岩宁方对肺癌小鼠生存质量、生存期及CD4+CD25+Treg/Foxp3的影响

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目的:研究肺岩宁方(FeiyanningDecoction,FYN)对Lewis肺癌小鼠生存质量、生存期、CD4+CD25+调节性T细胞(Tregulatorycell,Treg)及转录因子Foxp3表达的影响,探讨肺岩宁方抗肺癌的免疫机制。  方法:建立小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型后,将6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组和综合治疗组。给予相应药物干预14天后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量、肺脏指数、脾脏指数、胸腺指数、生存期等,小动物活体成像分析系统动态观察肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响,流式细胞术检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤CD4+CD25+T细胞的比例、实时荧光定量PCR检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤Foxp3mRNA的表达水平,Westernblot检测各组小鼠胸腺、脾脏和移植瘤Foxp3蛋白的表达水平。  结果:  (1)在肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠生存质量和生存期影响的研究中,结果显示:中药组小鼠的脾脏和胸腺指数降低,去瘤体质量增加,移植瘤重量减小,与模型组比较有统计学意义(P<0.05),中药组小鼠的生活质量较模型组明显改善;综合治疗组脾脏指数下降,移植瘤重量减小,与化疗组比较有统计学意义(P<0.05),综合治疗组小鼠的生活质量较化疗组明显改善;四组的中位生存时间依次为:综合治疗组>中药组>化疗组>模型组(P<0.05)。  (2)在小动物活体成像分析系统动态观察肺岩宁方抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的研究中,结果显示:造模后第7、11、14天,中药组小鼠的皮下移植瘤荧光素酶的活性较模型组降低,有统计学意义(P<0.05);综合治疗组小鼠的皮下移植瘤荧光素酶的活性较化疗组降低,有统计学意义(P<0.05)。  (3)流式细胞术结果显示:中药组Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中CD4+CD25+Treg细胞比例显著降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05);综合治疗组Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中CD4+CD25+Treg细胞比例显著降低,与化疗组比较有统计学意义(P<0.05)。  (4)实时荧光定量PCR结果显示:与模型组比较,中药组Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中Foxp3mRNA表达水平显著下调,有统计学意义(P<0.05);与化疗组比较,综合治疗组Lewis肺癌小鼠脾脏中Foxp3mRNA表达水平显著下调,有统计学意义(P<0.05)。  (5)Westernblot结果显示:与模型组比较,中药组Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中Foxp3蛋白的表达水平显著下调,有统计学意义(P<0.05);与化疗组比较,综合治疗组Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤中Foxp3蛋白的表达水平显著下调,有统计学意义(P<0.05)。  结论:肺岩宁方通过改善荷瘤小鼠的行为体征,增加化疗后小鼠的饲料消耗量和体重,改善Lewis肺癌小鼠的生存质量;肺岩宁方,无论单独使用还是联合化疗,均可延长Lewis肺癌小鼠的中位生存期,并抑制Lewis肺癌小鼠皮下移植瘤的生长。肺岩宁方可抑制Lewis肺癌小鼠脾脏、胸腺和移植瘤CD4+CD25+Foxp3+rreg细胞的增殖,下调Lewis肺癌小鼠胸腺、脾脏和移植瘤Foxp3基因表达,且肺岩宁方联合化疗应用后上述疗效更佳。肺岩宁方的作用机制可能是通过降低CD4+CD25+Treg细胞比例、下调Foxp3mRNA及Foxp3蛋白表达,增强机体的抗肿瘤免疫应答,进而发挥抑瘤作用。
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