【摘 要】
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登革病毒是一种蚊媒传染病的病原体,可以引起人的登革热、登革出血热和登革休克综合征.该实验将E、NS1/NS2a基因分别克隆在真核表达载体上,联合免疫动物,通过其产生的E、NS1
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登革病毒是一种蚊媒传染病的病原体,可以引起人的登革热、登革出血热和登革休克综合征.该实验将E、NS1/NS2a基因分别克隆在真核表达载体上,联合免疫动物,通过其产生的E、NS1抗体及特异性的CTL细胞将登革病毒消除.一、E、NS1/NS2a基因扩增、克隆及鉴定;根据DV2（海南株）基因序列,分别设计出扩增E、NS1/NS2a基因的两对引物.二、pCXN2-IL-2和pCXN2-E-IL-2的构建及鉴定;将鼠源性的IL-2基因用从T载体pUCm酶切下来,将其定向克隆在pCXN2和pCXN2-E载体上,成功构建了pCXN2-IL-2和pCXN2-E-IL-2两个重组质粒.三、pCXN2-E和pCXN2-NS1/NS2a的真核表达;提取pCXN2-E和pCXN2-NS1/NS2a,然后用脂质体DMRIE转染COS-7细胞,对其表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western Blot鉴定.四、重组质粒的动物免疫.五、抗体分析.对NS1/NS2a组产生的NS1抗体进行补体结合实验,其结果显示所产生的抗体能够通过补体介导的溶细胞作用清除感染登革病毒的细胞.六、细胞免疫指标分析.七、动物保护实验.为进一步研制登革病毒DNA疫苗进行了探索.
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