细菌血红蛋白基因在顶头孢霉中表达的研究

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VHb基因能在供氧不足的条件下,在细胞水平改善氧运输效率,满足菌体的呼吸要求,增加目的产物的产量.为了解决顶头孢霉发酵过程中的耗氧问题,该实验将构建细菌血红蛋白基因表达载体,采用原生质体-PEG法导入顶头孢霉中表达.通过对培养基成分、菌丝体培养时间、胞壁溶解酶系统等条件对原生质体形成的影响的研究,确立了顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)YA原生质体制备的最适条件.构建了由构巢曲霉A.nidulans的三磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA引导的透明颤菌血红蛋白(VHb)基因表达质粒pVHbMWH、pVHbMW<,1>TI、pVHbMW<,1>TⅡ.在此基础上建立了顶头孢霉YA的原生质体-PEG转化系统.挑取20株转化子进行CO-VHb吸收光谱分析表明,有6株在420nm处有特征吸收峰.证明在这些转化子中产生了有功能的透明颤菌血红蛋白.
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