论文部分内容阅读
背景：脂筏是位于细胞膜上的膜脂双层内富含胆固醇和鞘脂的微区，有研究提示脂筏在EGF-R信号系统调节中起重要作用。而EGF-R在宫颈癌细胞呈过度表达，且已有研究表明EGF-R的激活可影响MMP-1、2、14的基因表达。而MMPs能够降解绝大多数ECM成分，是迄今为止发现的与宫颈癌浸润转移关系最为密切的一类蛋白水解酶。 目的：该实验探讨宫颈癌细胞系(Caski细胞)EGF-R的激活和脂筏的胆固醇水平变化对MMP-7基因表达的影响。并研究EGF-R的激活与脂筏的胆固醇水平变化之间的关系，及二者共同作用时，MMP-7基因表达的变化。 方法：用不同作用浓度和作用时间的EGF或β-甲基环糊精干预血清饥饿24h的宫颈癌Caski细胞，利用RT-PCR方法在mRNA水平检测MMP-7的基因表达，根据结果确定EGF和β-甲基环糊精的有效作用浓度和作用时间。然后，取血清饥饿24h之后的Caski细胞，将其分为四组：空白对照组，不给予任何刺激；实验组1，使用β-甲基环糊精祛除细胞膜胆固醇组；实验组2，为单纯EGF刺激组；实验组3，用β-甲基环糊精祛除细胞膜胆固醇后用EGF刺激。利用RT-PCR和Western blot方法检测对照组和实验组以及各实验组间Caski细胞MMP-7的表达情况。 结果：EGF使MMP-7表达水平上调，并在10ng/ml作用浓度时达上调最大程度，其上调作用具有时间依赖性；β-甲基环糊精使MMP-7表达水平上调，并在100μg/ml作用浓度时上调最大。并且，在作用时间达2小时后，对MMP-7表达水平上调达最大值；实验组1、2、3分别与对照组相比较，mRNA水平MMP-7的表达均高于对照组，且差异具有统计学意义(p值<0.01)。实验组3与对照组相比，MMP-7表达差异最为明显。各实验组之间MMP-7表达亦有差异，差异具有统计学意义(p值<0.05)。 结论：祛除脂伐胆固醇可以上调MMP-7的表达，并能增强EGF对MMP-7基因表达的上调作用，该研究提示脂筏功能紊乱有助于宫颈癌的浸润和转移。