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目的：鼻咽癌(NPC)是我国华南地区常见的一种恶性肿瘤，其发生有明显的地域性和家族集聚现象。研究表明其发病机理除与EB病毒感染、化学致癌物有关外，与遗传易感基因也有着密切的关系。RNA干扰(RNAinterference)是近几年来用于基因治疗肿瘤最热门的分子工具之一。本课题拟从基因治疗的角度、以重要的凋亡抑制基因bcl-xL为靶点，针对bcl-xL基因设计一RNA干扰系统，在细胞内持续诱导表达RNA干扰的短发夹状RNA(shorthairpinRNA，shRNA)的分子，利用该系统产生的shRNA在细胞内诱导特异序列的基因沉默，并观察其抑制肿瘤细胞增殖的效果，探讨鼻咽癌新的治疗策略。
方法：利用常规方法构建质粒载体pmU6；使用Ambion公司提供的网上设计软件，根据人bcl-xL基因序列及其二级结构特征，依据Tuschl等设计shRNA原则，确定bcl-xL基因的干扰位点并构建表达shRNA一系列质粒载体；荧光显微镜观察转染效果、流式细胞仪检测转染率；MTT法检测质粒载体对细胞生长增殖的抑制效应；RT-PCR、Western-blot分析表达shRNA质粒载体对有关基因mRNA和蛋白质表达的抑制效应；Hoechst33258染色荧光显微镜观察肿瘤细胞形态学的变化，PI染色流式细胞仪分析检测细胞凋亡。
结论：针对bcl-xL基因设计的干扰序列对鼻咽癌CNE-2Z细胞有较强的抑制作用，且具序列特异性，而对MCF-7、ECV-304、L-02细胞无明显抑制作用。表达bcl-xLshRNA质粒pmU6-sibclD可呈时间与剂量依赖性抑制CNE-2Z细胞的增殖，显著下调bcl-xL基因mRNA和蛋白水平；bcl-xL下调的同时也影响了bcl-2、caspase家族成员和P53的变化，表现为bcl-2的mRNA、caspase-3的mRNA和其蛋白水平表达下调，P53的蛋白表达水平上调，促进肿瘤细胞凋亡。所构建的RNAi系统能有效地抑制肿瘤细胞的增殖，用于基因功能的研究和癌症治疗。