禽流感病毒(AIV)属于正粘病毒科、A型流感病毒属的成员，主要引起禽类的全身性或呼吸道传染病。其中，H9N2亚型禽流感目前在很多国家的禽群中流行，对养禽业造成了严重的危害；而且该病毒已多次直接感染人类，对人类的健康造成了巨大的威胁。因此，对H9N2亚型禽流感进行深入研究，做好该病的防控工作在养禽业和公共卫生学方面具有重要的意义。 本研究对一株H9N2禽流感病毒A/Chicken/GuangDong/228/05(H9N2)(以下简称为AIV—228株)的HA基因进行了序列测定，遗传演化分析表明AIV—228株属于H9N2禽流感病毒欧亚系Ⅰ亚群。将HA基因开放阅读框从5’～3’分为A、B、C、D、E5段，大小分别为321bp、330 bp、339 bp、411 bp、420bp，克隆进原核表达载体pGEX—6P—1进行表达。化学荧光法Western blot鉴定结果表明E段(含有HA蛋白的422～560位氨基酸)与H9亚型禽流感标准HI血清有良好的反应原性。将E段基因细分成16个片段(E1～E16)进行精细表位作图，每一个片段上有16个氨基酸，相邻两个片段有8个氨基酸重叠。将16个片段分别在pGEX—6P—1载体中进行融合表达，得到的16个融合蛋白分别命名为GST—E1～GST—E16。利用化学荧光法Western blot和ELISA方法对纯化后的16个融合蛋白分析发现：GST—E4融合蛋白与H9亚型HI标准血清有较强的特异性反应。GST—E4融合蛋白和GST蛋白分别经弗氏佐剂乳化后，背部皮下免疫6周龄BALB/c鼠，得到的抗GST—E4融合蛋白免疫血清能特异性地被E4合成肽识别，而且能抑制AIV—228株在DF—1细胞上引起的细胞病变，中和效价为1:128。E4段氨基酸序列(HA蛋白的446～461位氨基酸，即HA2上108～123位氨基酸，序列为LDEHDANVNNLYNKVK)与世界范围内和中国大陆流行的H9N2亚型流感病毒的HA2上108～123位氨基酸相比，非常保守。 本研究首次证明E4(HA上446～461位氨基酸)是AIV—228毒株HA2蛋白上一个线性的、保守的、有中和活性的抗原表位。本研究结果为HA2蛋白结构与功能的研究、H9N2亚型禽流感表位疫苗的研制和合成肽ELISA检测方法的建立提供了重要的实验数据。