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目的:1.采用CIA为RA的动物模型,观察EGCG对CIA小鼠CⅡ特异性T细胞增殖的影响。2.取RA患者血、滑液及滑膜,观察EGCG对PBMC和SFMC中T细胞及FLS增殖的影响;采用细胞学和基因学方法在细胞水平分析EGCG对细胞的免疫调节机制。
方法：1、通过同位素掺入实验,在体外研究EGCG对CIA小鼠CⅡ特异性T细胞增殖的影响,以Control组为阴性对照,MTX为阳性对照,来阐明EGCG的免疫调节作用;2、通过同位素掺入实验,在体外研究EGCG对RA患者PBMC及SFMC中T细胞增殖的影响,以Control组为阴性对照,MTX为阳性对照,来阐明EGCG的免疫调节作用;3、通过ELISA检测法,体外研究EGCG对RA患者PBMC及SFMC分泌细胞因子水平,探讨EGCG是否通过调节Th1/Th2平衡和抑制促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-17A、IL-6及IL-1β,促进IL-4分泌发挥免疫调节作用;4、采用real-time PCR方法检测EGCG对RA患者PBMC、SFMC分泌TNF-α、IFN-γ、IL-17A、IL-6、IL-4及IL-1β基因表达的影响。5、通过MTT比色法,在体外研究EGCG对RA患者FLS的增殖影响,以MTX为阳性对照,来阐明EGCG的免疫调节作用。
结果：1.EGCG在体外可明显抑制CⅡ特异性T细胞增殖,medium组的cpm为4722±332;control组cpm为9257±877;MTX组cpm为2942±297;EGCG 10μM组的cpm为3727±554。EGCG 20μM组的cpm为2846±175。EGCG 40μM组的cpm为1411±122。其中control组与medium组有显著的统计学差异(p＜0.05);MTX组及EGCG各组与control组之间均有显著统计学差异(p＜0.05)。2.EGCG在体外可明显抑制RA患者PBMC及SFMC中T细胞的增殖,medium组的cpm为(915±147,3445±1131);control组cpm为(42856±2127,35748±4512);MTX组cpm为(37536±2276,20294±4017);EGCG 10μM组的cpm为(33381±2643,16117±3859);EGCG 20μM组的cpm为(26864±2872,12575±3493);EGCG 40μM组的cpm为(15136±2910,11587±3135)。Control组与medium组之间有显著的统计学差异(p＜0.01)。E40组与control之间均有显著统计学差异(p＜0.01)。3、在体外ELISA及real-time PCR均证实EGCG及MTX可明显抑制TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6和IL-17分泌,并可上调抑炎因子IL-4的分泌。4.MTT法检测显示EGCG体外可抑制RA FLS增殖,EGCG40μM组与control组之间有统计学差异(p＜0.05)。
结论：1、EGCG可体外抑制CⅡ特异性T细胞增殖;2、抑制PBMC及SFMC增殖和TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6和IL-17分泌,上调抑炎因子IL-4分泌;3、体外抑制RAFLS增殖。