【摘 要】
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参考CeneBank收录的伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的序列设计了三对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.对重组质粒进行限制内切酶分析和基因测序
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参考CeneBank收录的伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的序列设计了三对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体.对重组质粒进行限制内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性.阳性质粒分别命名为pGEM-gD、pGEM-gE、pGEM-TK.将gD、gE基因连接于质粒pUC18获得pUgDgE,缺失质粒pUgDgE的BamHI和BsteII位点间391bp的片段.在此缺失位置插入来自质粒pcDNA3.1-的一段含hCMV启动子、多克隆位点和Neo报告基因的片段,构建了通用转移载体pgD-M-gE.该转移载体缺失了伪狂犬病病毒gI基因和gE基因ORF5端363bP的碱基,有11个酶切点可供外源基因的插入,上下游侧翼分别为1.25kb和1.42kb.这为开发以伪狂犬病病毒为载体的多价基因工程疫苗提供了有力的工具.
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