创伤弧菌FJ03-X2荚膜多糖的提取和免疫原性分析

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创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是严重危害水产动物的人兽致病菌。荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)是创伤弧菌重要的毒力因子和抗原成分,在创伤弧菌的致病过程中起重要作用,为了了解创伤弧菌CPS的免疫原性,本研究以鳗源创伤弧菌强毒株FJ03-X2为研究对象,提取纯化了创伤弧菌CPS,并对其成分、分子量,毒力和免疫原性进行了分析。紫外吸收分光光度法测定CPS样品,其主要峰值在200nm,基本符合多糖吸收峰的特征;SDS-PAGE的双氨银染图谱未见明显的蛋白质和脂多糖条带;琼脂糖凝胶电泳结果显示CPS样品含少量核酸成分。结果表明提取得到较纯的CPS。通过SDS-PAGE和阿尔新蓝-双氨银染法分析CPS,结果表明,CPS的相对分子量分布范围为311~20 KDa;CPS可分为高分子量成分和低分子量成分;高分子量成分仅用阿尔新蓝染色即可在凝胶上清晰显示,呈现为连续的弥散状区带,其含量较高,相对分子量范围为311~43 KDa;低分子量成分则需阿尔新蓝-双氨银染法染色才能在凝胶上显示,其含量较低,相对分子量范围为43~20 KDa。用CPS经腹腔注射免疫昆明鼠,通过菌体凝集反应、ELISA和Dot ELISA等方法分析CPS对鼠的免疫原性,结果显示,鼠抗CPS血清可和一定浓度的创伤弧菌菌株FJ03-X2菌液发生凝集反应,凝集效价为24~5;ELISA结果表明鼠抗CPS血清的抗体效价可达1∶12 800。初步说明,鳗源创伤弧菌菌株FJ03-X2的CPS对小鼠具有免疫原性,能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。毒力试验表明,CPS对欧鳗无直接致病力。CPS经腹腔注射免疫接种欧鳗,Dot ELISA结果显示,CPS不能激发试验欧鳗产生体液免疫应答;免疫保护试验表明,CPS不能诱导试验欧鳗产生保护性免疫应答。
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