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中药注射剂在我国已经有80余年的临床应用历史，尤其广泛应用于心脑血管和肿瘤等疾病的治疗中。目前，获得CFDA批准的中药注射液有121种，866个批准文号。2011年我国中药注射剂市场规模接近300亿元。在临床上中药注射液与西药合用的现象较为普遍，可能有潜在的代谢性药物相互作用存在。代谢性药物相互作用可导致协同增效，也能导致不良反应。其有益相互作用可以被临床积极利用，以提高疗效，降低不良反应和治疗药物的费用。不利相互作用可导致疗效降低或者毒性增加。但目前对于心血管类与抗肿瘤类中药注射剂代谢性相互作用的研究较少，因此本研究以此为切入点构建评价中药注射液代谢性药物相互作用的体外平台，研究临床常用的10种心血管类和4种抗肿瘤类中药注射液对人细胞色素P450(CYP450)7种主要亚型体外抑制作用。 本研究结果有助于优化临床给药方案，为临床上联合使用提供科学依据，提高临床用药的有效性和安全性。 第一部分同时测定7种CYP450酶底物代谢产物的LC-MS/MS方法建立与验证 目的:建立同时测定7种主要CYP450酶探针底物的相应代谢产物:对乙酰氨基酚(CYP1A2)、羟基安非他酮(CYP2B6)、N-去甲阿莫地喹(CYP2C8)、4-羟基双氯芬酸(CYP2C9)、4-羟基美芬妥英(CYP2C19)、右啡烷(CYP2D6)和1-羟基咪达唑仑(CYP3A4/5)的LC-MS/MS检测方法并进行考察。比较“Cocktail”探针底物在混合人肝微粒体与“Cocktail”探针底物在各重组酶中代谢产物的差异，比较“Single”与“Cocktail”探针法底物活性差异。方法:以含内标的终止液沉淀蛋白进行样品处理;流动相A:水（0.1％甲酸），流动相B:乙腈（0.1％甲酸），采用梯度洗脱法:0→4.0 min，5％→80％(B);4.0→4.2 min，80％(B);4.2→6.0min，80％→5％(B);流速:0.3 mL·min-1;柱温:40℃。质谱采用ESI源，正离子模式，喷雾电压4000V，雾化气为氮气，雾化气压力为40psi，去溶剂气为氮气，干燥气体温度350℃，干燥气流流速11 L·min-1。采用多反应监测(MRM)模式对各个代谢产物及内标进行测定。结果:基质中对乙酰氨基酚在40～4000nM、羟基安非他酮6～600nM、N-去甲阿莫地喹3～300nM、4-羟基双氯芬酸24～2400nM、4-羟基美芬妥英20～2000nM、右啡烷4～400nM、1-羟基咪达唑仑20～2000nM的浓度范围内线性关系良好。准确度为85.89％-113.35％，日间精密度(RSD％＜13.95)与日内精密度(RSD％＜9.90)良好。样品提取物在25℃，48小时内稳定。“Cocktail”探针底物代谢产物在混合人肝微粒体与在各重组酶中的保留时间基本一致。“Cocktail”探针法中底物活性CYP2C19与CYP2D6分别占“Single”探针法的50％与52％，其余均大于70％。结论:本研究建立的人肝微粒体中“Cocktail”探针底物法操作简便，专属性、精密度、准确度、灵敏度高，检测周期短，能够在一次实验中评价化合物在体外对人肝微粒体7种主要CYP450酶亚型CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5活性的影响。 第二部分“Cocktail”探针底物法评价丹红注射液等10种心血管类中药注射液对人肝微粒体中7种CYP450酶亚型的体外抑制作用 目的:采用上述建立的“Cocktail”探针底物法，研究丹红注射液等10种心血管类中药注射液对人肝微粒体中7种CYP450酶亚型的体外抑制作用。比较阳性抑制剂IC50值在“Single”与“Cocktail”探针底物法中的区别。方法:孵育体系包括“Cocktail”探针底物(体系终浓度分别为20/30/0.1/1/40/2/2μM，非那西丁/安非他酮/阿莫地喹/双氯芬酸/(S)-美芬妥英/右美沙芬/咪达唑仑，小于Km值）、混合人肝微粒体、NADPH、PBS、MgCl2、总体积为250μL，以上述建立的LC-MS/MS法测定生成的代谢产物，选择CYP450酶专属阳性抑制剂:呋拉茶碱(CYP1A2)、塞替派(CYP2B6)、槲皮素(CYP2C8)、磺胺苯吡唑(CYP2C9)、噻氯匹定(CYP2C19)、奎尼丁(CYP2D6)、酮康唑(CYP3A4/5)或丹红注射液等10种心血管类中药注射液系列浓度，加入上述孵育体系中、测定生成的代谢产物，将代谢产物与内标峰面积比值与空白对照样品（无抑制剂）比较，以其百分比为纵坐标，抑制剂浓度的对数值为横坐标，计算相应IC50值。结果:7种专属阳性抑制剂在本“Cocktail”探针法中所测定的IC50值与“Single”探针法中测定值及文献报道值接近。10种心血管类中药注射剂中，丹红注射液对CYP1 A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5的IC50值分别为0.49％、0.62％、0.09％、0.98％、0.81％、0.77％和0.50％，红花注射液对CYP2C8的IC50值为0.3％。结论:在正常剂量下，心血管类中药注射液丹红注射液对人CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4/5在体外均有明显抑制作用，红花注射液在体外对人CYP2C8有明显抑制作用。这些中药注射液与经CYP450酶代谢药物联合使用时，可能产生协同增效，也可能引起代谢性药物相互作用导致的不良反应，临床使用时应予以关注。 第三部分“Cocktail”探针底物法评价消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射液对人肝微粒体中7种CYP50酶亚型的体外抑制作用 目的:用上述建立的“Cocktail”探针底物法，研究消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射液对人肝微粒体中7种CYP450酶亚型的体外抑制作用。方法:孵育体系包括“Cocktail”探针底物(体系终浓度分别为20/30/0.1/1/40/2/2μM，非那西丁/安非他酮/阿莫地喹/双氯芬酸/(S)-美芬妥英/右美沙芬/咪达唑仑，小于Km值）、混合人肝微粒体、NADPH、PBS、MgCl2、总体积为250μL，以上述建立的LC-MS/MS法测定生成的代谢产物，消癌平注射液等4种抗肿瘤中药注射液系列浓度，加入上述孵育体系中、测定生成的代谢产物，将代谢产物与内标峰面积比值与空白对照样品（无抑制剂）比较，以其百分比为纵坐标，抑制剂浓度的对数值为横坐标，计算相应IC50值。结果:4种抗肿瘤中药注射液中，消癌平注射液对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5的IC50值分别为0.51％、1.34％、1.42％、0.93％、1.09％和0.75％，艾迪注射液对CYP2C8的IC50值为0.21％。结论:在体外，正常剂量下，消癌平注射液对人CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4/5，艾迪注射液对人CYP2C8均有明显抑制作用。这些中药注射液与经CYP450酶代谢药物联合使用时，可能产生协同增效，也可能引起代谢性药物相互作用导致的不良反应，应提高警惕。