【摘 要】
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蛇足石杉是一种重要的蕨类植物,其活性成分石杉碱甲是一种高效、可逆、高选择性的胆碱酯酶抑制剂,对治疗阿尔茨海默病、提高学习记忆力和改善老年人记忆功能有显著疗效,近年
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蛇足石杉是一种重要的蕨类植物,其活性成分石杉碱甲是一种高效、可逆、高选择性的胆碱酯酶抑制剂,对治疗阿尔茨海默病、提高学习记忆力和改善老年人记忆功能有显著疗效,近年来成为学者研究的热点之一。内生真菌是一种新兴的药物资源,而蛇足石杉一个重要的生物学特征就是其生活史与内生真菌的关系密切。本课题进行了蛇足石杉内生真菌的分离纯化、形态鉴定、发酵产物活性筛选、活性菌株分子学鉴定以及对有胆碱酯酶抑制活性菌株发酵产物活性成分检测工作。本文主要内容和结果如下:
1.较为系统的对不同产地的蛇足石杉内生真菌进行了分离纯化和筛重工作,从100余株次内生真菌中通过形态比较筛选出37株菌株,初步鉴定出3纲8目12科的真菌种类。种群数量分布不均匀,种群分布主要集中在半知菌类,约占菌株总数的59.4%,其次为子囊菌纲,约占31.4%。其中,丛梗孢目的分离菌株达到总数的29.7%,为蛇足石杉体内的优势种群。约有24.3%的真菌不产生孢子。
2.运用不同的活性筛选模型对分离到的蛇足石杉内尘真菌发酵产物进行活性筛选一株菌株具有乙酰胆碱酯酶抑制活性。根据常规的化学提取方法,提取具有抗乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌中活性物质,以石杉碱甲为对照品,采用HPLC法分别检测,菌丝体提取物和发酵液提取物未检测到石杉碱甲,判断该活性成分不是石杉碱甲。5株菌株抑菌作用较明显,并求算出其抑制菌种的MIC。
3.使用先进的分子生物学技术,测定了六蛇足石杉内生真菌的5.8S rDNA和18SrDNA序列,通过构建系统发育树,结合初步形念鉴定的结果,大致确定了6株活性菌株的科属。
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