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水稻(Oryza satixa L.)是世界上最重要的粮食作物之一,在人口剧增及环境不断恶化的形势下,有效地利用杂种优势机理来提高水稻的产量是非常重要的途径。杂种优势指遗传基础不同的两个亲本杂交产生的杂种F1代在某些性状上优于其亲本的现象,如:杂种的旺势、较高的结实率及进化上的优越性等。目前,杂种优势的分子机理仍然不清楚。数量性状位点(quantitative trait loci,QTL)在杂种优势中得到广泛应用,可以用来解释各种与产量相关的农艺性状。但是,QTL是多个基因控制的,且每个基因都是微效的还极易受环境和遗传背景的影响,目前,被成功克隆的基因不多,QTL导致杂种优势形成机理仍然是个谜。通过生物信息学手段,预测到许多不同的miRNA存在于与杂种优势相关的QTL区间。microRNAs(miRNA)是一类由19-25nt组成的非编码的单链小分子RNA,广泛存在于植物基因组中,调控着植物的生长发育、激素分泌、信号转导及抗逆等过程。大多数植物miRNA还呈现出组织特异性表达和发育阶段特异性表达的特点,且具有调控自身转录的机制。我们取得的主要研究结果如下:
1、通过对水稻珍汕97A(Zhenshan97A,ZS97A)、明恢63(Minghui63,MH63)、汕优63(Shanyou63,SY63)四叶期、分蘖期及抽穗期miRNA,主要涉及到花和叶片的发育、激素、信号转导、磷运输、碳水化合物的代谢等,并对其目标基因的表达进行分析。结果发现,miRNA的表达存在组织特异性且某些特异的miRNA参与到了水稻的生长、分蘖、抽穗及开花等生命进程中,和水稻的进化密切联系在一起。
2、对抽穗期水稻ZS97A、MH63、SY63预测的miRNA及其目标基因的表达同样进行了初步分析。结果显示,抽穗期QTL相关的miRNA(QTL-relatedmiRNA)的表达同样存在组织特异性;QTL-related miRNA在杂种F1代穗中有55.56%表现为正向超显性,说明其确实参与了抽穗期发育过程,影响了水稻的开花结实、生长发育等进程。
3、成功构建了4个目标基因短小模拟物(Short tandem target mimic,STTM)载体并转化水稻中花11(Zhonghua11,ZH11),获得了转基因植物,对其表型及花粉育性进行观察分析,已经出现了预期的一些表型,有待深入研究。
4、对抽穗期ZS97A和ZS97B中调控转录因子相关miRNA和QTL-related miRNA做了定量分析;实验结果表明:ZS97A和ZS97B QTL-related miRNA穗中的表达与转录因子相关的miRNA表达相反,大部分QTL-related miRNA在ZS97B中的表达高于ZS97A穗中的表达。
5、另外,通过外源施加10μM GA3,对抽穗期ZS97A和ZS97B中GA合成代谢及信号转导过程中关键基因的表达做了初步分析,研究miRNA的表达与GA的合成信号途径的相关性。结果表明,外源施加10μM GA3可以促进水稻倒一节的生长,减缓包穗。同时,GA3合成代谢途径及信号转导途径中的关键基因在ZS97A中上调趋势比在ZS97B中明显。
总之,研究结果表明:miRNA特别是QTL-related miRNA在杂种优势形成中起到了重要的作用,为杂种优势机理的研究提供了崭新的观点。