本研究以构建可以获得稳定遗传的荧光蛋白标记基因工程菌为目的，先后使用自杀性转座质粒和定点同源重组的方法获得荧光标记的脱色希瓦氏菌(Shewanella decolorationis)S12菌株。　　 采用分子生物学手段将具有转座功能的自杀性质粒pTnMod-okm与荧光蛋白基因eyfp构建重组质粒pTE-okm。pTE-okm通过结合转移从大肠杆菌S17-1进入脱色希瓦氏菌S12中，质粒上的转座子元件转座到S12的染色体上。荧光显微镜下筛选到表达荧光蛋白的脱色希瓦氏菌克隆，通过PCR确定质粒pTE-okm已经在脱色希瓦氏菌中自杀。筛选得到生长速度未发生延迟、脱色能力不受影响的荧光标记菌株S12-40。标记的脱色希瓦氏菌在无抗生素压力的情况下培养，传代20次(8小时/次)后在荧光显微镜下依然观察到菌体发出的荧光。　　 在NCBI数据库中获取希瓦氏菌属的模式菌株Shewanella oneidensis MR-1的全基因组图谱，确定位于基因S00500和S00501间的一段1300bp不编码蛋白的空白序列作为荧光蛋白的定向插入位点。使用重叠引物将eyfp荧光蛋白基因置于脱色希瓦氏菌S12的启动子PazoR控制下。采用同样的方法将PazoR和eyfp连接后的片段插入到不编码蛋白的S12空白序列中问。所获得的1.9kb的重组片段通过电穿孔转化到脱色希瓦氏菌中；在SOC培养基中活化5个小时后，涂布在琼脂平板上筛选表达荧光蛋白的重组子菌株，命名为S12-SF。提取重组子总DNA，PCR扩增得到荧光蛋白基因和1.9kb重组DNA片段，证实目标基因已经通过同源重组插入到脱色希瓦氏菌S12染色体上。该菌株在LB平板上连续纯化转接后仍然保持良好的荧光特性。　　 所获得的荧光标记脱色希瓦氏菌为进一步研究其生态学行为奠定了基础。