【摘 要】
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研制出了4株抗人B7H1的单克隆抗体1A8、1H9、5E9、6C8,并对4株抗体进行了纯化和特性鉴定:1.4株单克隆抗体的亲和力相差不大。2.单抗5E9能通过Western-blot实验与人B7H1结合,1A8
【出 处】
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中国科学院生物物理研究所(北京) 中国科学院生物物理研究所
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研制出了4株抗人B7H1的单克隆抗体1A8、1H9、5E9、6C8,并对4株抗体进行了纯化和特性鉴定:1.4株单克隆抗体的亲和力相差不大。2.单抗5E9能通过Western-blot实验与人B7H1结合,1A8、1H9、6C8都不能通过Western-blot实验与人B7H1结合。3.单抗6C8与单抗5H1有相同的结合位点,单抗1A8、1H9、5E9与单抗5H1有不同的结合位点,可以与单抗5H1组合进行夹心elisa检测可溶性B7H1,检测最低敏感度为2ng/ml。4.单克隆抗体1A8、1H9、5E9、5H1、6C8都不能阻断B7H1与PD-1的结合。
单克隆抗体1A8与5H1组合通过夹心elisa检测了13个自身免疫病病人的血清,发现1个病人血清中含有可溶性B7H1,2个病人血清中含有抗B7H1的抗体;在17例正常人血清,14例肾衰竭病人血清和36例肾移植病人血清中未发现可溶性B7H1。
尝试了用甲醛固定的B7H1、甲醛固定后乙醇脱水的B7H1、线性化的B7H1为抗原分别免疫小鼠,但是都无法从免疫小鼠的血清中检测到抗石蜡切片B7H1的抗体,也曾多次将sp2/0细胞与脾细胞融合筛选目的抗体,都无法得到能和石蜡切片B7H1直接结合的抗体。本实验室已有的单抗5H1能够与抗原修复后的石蜡切片B7H1结合,但检出率无法达到100%,今后应该研制开发能与未经抗原修复的石蜡切片结合并且检出率为100%的抗B7H1单克隆抗体。
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