溃疡性结肠炎大肠湿热证与脾虚湿蕴证患者肠道菌群的研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:harric1234
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目的:  本文主要通过对溃疡性结肠炎大肠湿热证患者、脾虚湿蕴证患者以及健康人肠道菌群定性与定量的研究,比较UC患者与健康人、大肠湿热证和脾虚湿蕴证患者之间肠道菌群的差异。探讨肠道菌群与UC发病的关系;疾病相关性的中医虚实证型肠道菌群差异的病理基础;中医辨证论治的可能作用机制。为肠道菌群在UC的中医证型诊治方面提供理论及实验依据。  方法:  本次实验以UC患者和健康志愿者为研究对象,其中UC患者均来自上海中医药大学附属龙华医院脾胃病科门诊和病房。提取研究对象粪便中肠道细菌的DNA,首先通过浓度与纯度的分析后确定所提取的DNA可以进行后续操作研究。之后通过细菌通用引物515F-806R测定DNA的基因序列。  通过DGGE凝胶电泳技术对所提取的DNA进行图谱分析,使用Quantity One软件检测图谱中的电泳条带数目、频率以及灰度值分析,进而通过香农指数(Shannon-Wiener)的分析,确定大肠湿热证UC患者、脾虚湿蕴证UC患者以及健康人肠道菌群的多样性指数。最后,通过生物信息学分析,用OTUs聚类分析、物种多样性分析、物种丰度分布和LEfse分析,检测不同组别中丰度有显著差异的物种(alpha value=0.05),并用LDA分数估计每个物种的效应尺度;逐步分析总结出健康人、大肠湿热证UC患者、脾虚湿蕴证UC患者三组组间肠道菌群中细菌在门水平上和属水平上的差异菌群。并通过生物进化图的分析形象展示三组样本中肠道菌群从门到属的各层级差异菌群。  结果:  1.(1)大肠湿热证UC患者与健康人在肠道菌群的物种多样性方面无显著差异(P>0.05)。  (2)脾虚湿蕴证UC患者与健康人在肠道菌群的物种多样性方面无显著差异(P>0.05)。  (3)大肠湿热证UC患者与脾虚湿蕴证UC患者在肠道菌群的物种多样性方面无显著差异(P>0.05)。  2.三组样本的肠道菌群均以厚壁菌门与拟杆菌门菌群所含数量最多,处于优势菌门的地位。放线菌门和变形菌门所占比例虽不及前两者,但相对于其他菌种也处于较高的比例水平,此四类菌门构成了肠道菌群的优势菌种。  3.三组在优势菌门(针对数量最多的厚壁菌门与拟杆菌门菌群)的比例差异:  (1)大肠湿热组与健康组的拟杆菌门所占的比例存在显著差异(P<0.05)。  (2)大肠湿热组与健康组的厚壁菌门所占的比例存在显著差异(P<0.05)。  (3)脾虚湿蕴组与健康组的拟杆菌门所占的比例无显著差异(P>0.05)。  (4)脾虚湿蕴组与健康组的厚壁菌门所占的比例无显著差异(P>0.05)。  (5)大肠湿热组与脾虚湿蕴组的拟杆菌门所占的比例存在显著差异(P<0.05)。  (6)大肠湿热组与脾虚湿蕴组的厚壁菌门所占的比例存在显著差异(P<0.05)  4.通过门水平上的相对丰度分析:  (1)脾虚湿蕴证UC患者拟杆菌门的含量最高,健康人次之,大肠湿热证UC患者最低(P<0.05)。  (2)大肠湿热证UC患者厚壁菌门的含量最高,健康人次之,脾虚湿蕴证UC患者最低(P<0.05)。  5.通过属水平上的相对丰度分析:  (1)大肠湿热证UC患者与健康人的肠道菌群在属水平上存在51种有明显差异的菌属(P<0.05)。  (2)脾虚湿蕴证UC患者与健康人的肠道菌群在属水平上存在36种有明显差异的菌属(P<0.05)。  (3)大肠湿热证UC患者与脾虚湿蕴证UC患者的肠道菌群在属水平上存在26种有明显差异的菌属(P<0.05)。  6.在生物进化图的比较中发现,健康人与脾虚湿蕴证UC患者绿弯菌门含量存在显著差异(P<0.05)。  7.通过属水平上的LEfse分析:  (1)健康人与大肠湿热证UC患者瘤胃球菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且健康组含量明显高于UC组。  (2)健康人与大肠湿热证UC患者对位拟杆菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且健康组含量明显高于UC组。  (3)健康人与脾虚湿蕴证UC患者瘤胃球菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且健康组含量明显高于UC组。  (4)健康人与脾虚湿蕴证UC患者对位拟杆菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且健康组含量明显高于UC组。  (5)脾虚湿蕴证与大肠湿热证UC患者瘤胃球菌属的含量无显著差异(P>0.05)。  (6)脾虚湿蕴证与大肠湿热证UC患者对位拟杆菌属的含量无显著差异(P>0.05)。  8.通过属水平上的LEfse分析:  (1)健康人与脾虚湿蕴证UC患者柔嫩菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且UC组含量明显高于健康组。  (2)健康人与大肠湿热证UC患者柔嫩菌属的含量存在显著差异(P<0.05),且UC组含量明显高于健康组。  结论:  1.大肠湿热证UC患者优势菌门(拟杆菌门)所占的比例低于健康人,而厚壁菌门高于健康人。  2.脾虚湿蕴证UC患者绿弯菌门所占的比例高于健康人。  3.脾虚湿蕴证、大肠湿热证UC患者与健康人的肠道菌群从门到属水平上均存在一定差异。
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