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目的：通过针灸对结肠器质性疾病溃疡性结肠炎(UC)和功能性疾病肠易激综合征(IBS)的实验与临床研究,阐述针灸对肠腑病症调节的作用机制。
方法：
(1)采用免疫法加局部刺激制备UC大鼠模型,随机将大鼠分为模型组、隔药灸天枢组、隔药灸上巨虚组和隔药灸上巨虚+天枢组,并与正常大鼠对照。隔药灸治疗每天1次,每次2壮,共治疗7天。治疗后记录大鼠症状、体征变化；应用光镜观察结肠黏膜病理形态变化；免疫组织化学法观察UC大鼠结肠黏膜IL-12、IFN-γ、IL-4、IL-10表达,以及采用实时荧光定量PCR观察UC大鼠结肠黏膜STAT-3和STAT-4 mRNA的表达。
(2)乳鼠在出生后第8-21天,每天都接受两次机械性直肠结肠扩张刺激。全部机械性直肠结肠扩张刺激结束后直到乳鼠长成成年大鼠(至少6周),然后采用行为学指标-急性直肠结肠球囊扩张刺激检测内脏痛。内脏高敏感性大鼠从出生后第36天开始接受隔药灸天枢、温和灸天枢治疗,共7天,每天1次,每次15分钟。在电针治疗后的30-90分钟内检测腹部撤回反射(AWR)评分,并在7次电针治疗结束后,剪取长约1cm结肠组织(离肛门5cm处开始),分别采用HE染色法观察结肠黏膜组织病理学变化：酶联免疫检测法检测结肠黏膜5-HT浓度；免疫组织化学法检测结肠黏膜5-HT3R,5-HT4R和SERT的表达以及脊髓背角和脑干5-HT的表达：实时荧光定量PCR法检测结肠黏膜5-HT3R mRNA,5-HT4R mRNA表达。
(3)乳鼠在出生后第8-21天,每天都接受两次机械性直肠结肠扩张刺激。全部机械性直肠结肠扩张刺激结束后直到乳鼠长成成年大鼠(至少6周),然后采用行为学指标-急性直肠结肠球囊扩张刺激检测内脏痛。内脏高敏感性大鼠从出生后第36天开始接受电针上巨虚、假电针上巨虚、电针上巨虚+天枢、假电针上巨虚+天枢治疗,共7天,每天1次,电针与假电针每次30分钟。在电针治疗后的30-90分钟内检测腹部撤回反射(AWR)评分,并在7次电针治疗结束后,剪取长约1cm结肠组织(离肛门5cm处开始),分别采用HE染色法观察结肠黏膜组织病理学变化；酶联免疫检测法检测结肠黏膜5-HT浓度；免疫组织化学法检测结肠黏膜5-HT3R,5-HT4R和SERT的表达以及脊髓背角和脑干5-HT的表达；实时荧光定量PCR法检测结肠黏膜5-HT3R mRNA,5-HT4R mRNA表达。
(4)将符合罗马Ⅱ功能性胃肠疾病分类及诊断标准的10例腹泻型肠易激综合征患者作为治疗组,并设10名健康人作为对照组。采用双侧天枢穴针刺治疗,进针1寸,得气后按平补平泻法捻转3min左右,取针后用电子结肠镜进行结肠蠕动频率观察。
结果：
1.隔药灸对大鼠溃疡性结肠炎结肠Th1/Th2类细胞因子调节作用研究。
1.1 UC大鼠结肠黏膜的损伤情况。
1.2 UC大鼠结肠黏膜IL-12的表达。
1.3 UC大鼠结肠黏膜IFN-γ的表达。
1.4 UC大鼠结肠黏膜IL-4的表达。
1.5 UC大鼠结肠黏膜IL-10的表达。
1.6 UC大鼠结肠黏膜STAT3 mRNA表达。
1.7 UC大鼠结肠黏膜STAT4 mRNA表达。
2.隔药灸、温和灸天枢对内脏高敏感性大鼠AWR及5-HT途径的调节作用。
2.1 内脏高敏感性大鼠结肠黏膜HE染色结果。
2.2 单次艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠异常升高AWR评分的影响。
2.3 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT浓度的影响。
2.4 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT3R表达的影响。
2.5 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT3R mRNA表达的影响。
2.6 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT4R表达的影响。
2.7 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT4R mRNA表达的影响。
2.8 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜SEPT表达的影响。
2.9 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠脊髓背角5-HT表达的影响。
2.10 艾灸对慢性内脏高敏感性大鼠脑干5-HT表达的影响。
3.电针对内脏高敏感性大鼠AWR及5-HT途径的调节作用。
3.1 内脏高敏感性大鼠结肠黏膜HE染色结果。
3.2 单次电针对慢性内脏高敏感性大鼠异常升高AWR评分的影响。
3.3 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT浓度的影响。
3.4 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT3R表达的影响。
3.5 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT3R mRNA表达的影响。
3.6 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT4R表达的影响
3.7 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜5-HT4R mRNA表达的影响。
3.8 电针对慢性内脏高敏感性大鼠结肠黏膜SERT表达的影响。
3.9 电针对慢性内脏高敏感性大鼠脊髓背角5-HT表达的影响。
3.10 电针对慢性内脏高敏感性大鼠脑干5-HT表达的影响。
4 针刺对腹泻型肠易激综合征患者结肠蠕动的即时效应观察。
针刺后,腹泻型肠易激患者肠鸣音、结肠蠕动频率较针刺前明显降低(P<0.05,P<0.05),健康人对照组针刺前后肠鸣音及结肠蠕动频率无显著差异(P>0.05,P>0.05)。
结论：
1.隔药灸上巨虚、天枢穴(合募配穴)可以调节UC大鼠结肠黏膜Th1/Th2类细胞因子的平衡,以及IL-12/STAT-4信号转导,以实现对肠腑(结肠)的调节作用。
2.隔药灸大肠募穴天枢与温和灸大肠募穴天枢均可下调IBS大鼠结肠黏膜异常升高的5-HT浓度和5-HT3R表达,以实现对肠腑病症慢性高敏感性的外周调节。
3.隔药灸与温和灸大肠募穴(天枢)可以下调IBS大鼠脊髓背角内异常升高的5-HT表达,上调脑干异常降低的5-HT表达,以实现对肠腑病症慢性高敏感性的中枢调节。
4.电针合募配穴(上巨虚配天枢)和下合穴(上巨虚)可以下调IBS大鼠结肠粘膜异常升高的5-HT浓度、5-HT3R表达、5-HT4R表达,以实现对肠腑病症慢性高敏感性的外周调节。
5.电针合募配穴(上巨虚配天枢)和下合穴(上巨虚)可以下调IBS大鼠脊髓背角内异常升高的5-HT表达,上调脑干异常降低5-HT表达,以实现对肠腑病症慢性高敏感性的中枢调节。
6.针刺募穴(天枢)对腹泻型肠易激综合征患者结肠蠕动有即时疗效。