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目的:p63是p53家族成员之一,近年来发现与肿瘤发生关系密切。由于启动子和选择性剪接的不同,p63可产生两大类蛋白异构体。主要异构体ΔNp63过表达于头颈部鳞癌及其他鳞状上皮源性肿瘤中,作为转录因子通过调控下游靶基因,对肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡等起重要的调节作用。我们前期研究发现,ΔNp63在喉鳞癌原发灶肿瘤细胞中显著高表达,推断ΔNp63在维持肿瘤细胞的增殖、抑制细胞凋亡方面发挥重要作用,但其调控和作用机制复杂未明。
方法:本实验从几个头颈部鳞癌细胞系中筛选出高表达ΔNp63的FaDu细胞系,采用RNAi技术分别抑制ANp63及p63表达。RT-PCR、Western-blot、免疫组化、MTT法、流式细胞术检测等方法从细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡等方面研究FaDu细胞生物学行为改变;并检测RNAi后与周期调控及细胞凋亡相关基因的表达改变。
结果:ANp63在FaDu细胞中高表达,定位于细胞核。敲减所有p63异构体表达后,部分细胞形态由鳞状上皮样伸长变细,获得间充质细胞表型;而仅敲减ΔNp63表达无此变化。抑制FaDu细胞ΔNp63及p63表达后,细胞增殖能力均明显下降,出现细胞周期阻滞,主要发生G1期;与对照组比较,细胞总凋亡率增高达10％,差异显著有统计学意义(P＜0.05);CDK抑制因子p21及p27蛋白表达发生上调;促凋亡因子Bax、p53表达上调,而凋亡抑制因子Bcl-2蛋白表达下调。
结论:ΔNp63在FaDu细胞中高表达,有促进细胞增殖、抑制凋亡维持细胞存活的功能。ΔNp63通过直接或间接抑制p21、p27及p53的表达,促进肿瘤细胞的增殖和生长;ΔNp63通过激活Bcl-2、抑制Bax表达,发挥抗凋亡作用维持肿瘤细胞的生存。具体调控机制有待于进一步研究。