白术的活性成分与质量标准研究

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白术为传统中药,中国药典收载白术(Rhizoma Atractylodis m acrocephalae)为菊科植物白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)的干燥根茎,具有健脾益气、燥湿利水等功效,用于治疗脾胃气弱、泄泻、汗出、胎动不安等。国内外学者虽对白术进行了大量研究,但到目前为止,中国药典中白术的定性、定量指标成分还没有明确,TLC定性鉴别以对照药材为标准,含量测定项为空白,白术的质量标准亟待提高。白术和苍术均为苍术属植物,白术临床主要用于补脾气,而苍术以燥湿为主,两者功效不同。白术始载于《神农本草经》,列为上品,未分苍、白术,直到张仲景之后,始将二者分开使用。本论文在前人的研究基础上,对白术的化学成分进行了系统研究,运用HPLC,UPLC-MS等技术对白术与苍术的化学成分进行了比较和研究,以其与苍术的差异性成分作为白术的指标性成分,为白术的质量控制提供依据。   一化学成分研究   采用现代分析、分离技术对白术(A.macrocephala)进行了化学成分的研究。从白术中分离并鉴定了13个化合物,其中倍半萜类的化合物有8个,3个首次从该种植物中分离得到的化合物,分别为丁二酸、东莨菪素、eudesm-4(15),7-diene-9 alpha,11-diol(7);其它已知化合物分别为白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、双白术内酯、双表白术内酯、杜松脑、白术内酰胺、β-谷甾醇、胡萝卜苷。   倍半萜类化合物是白术药材中的主要活性成分,但目前的研究主要集中在抗炎,抗癌活性上,尚未有其对B16细胞作用的研究报道。本文对分离得到的倍半萜类化合物进行了B16细胞酪氨酸酶活性和对B16细胞增殖活性的筛选,结果表明,八个倍半萜类化合物都具有潜在的抑制B16细胞增殖和抑制B16细胞中酪氨酸酶活性的作用。在所测定的化合物中,白术内酯I、II、III,白术内酰胺具有较好的抑制B16细胞增长的作用,其IC50分别为57.80±3.42μM,69.69±0.78μM,150.83±3.30μM和46.74±1.86μM。   二白术与苍术差异性成分的寻找   采用UPLC-PDA-ESI-MSn技术,对分离得到的倍半萜类化合物以及聚乙烯炔类的裂解规律进行了研究,在此基础上对白术与苍术的差异性成分进行了探讨。初步研究结果表明,倍半萜类化合物是白术中的特征性成分,聚乙烯炔类是苍术中的特征性成分。通过两种药材的UPLC上的色谱行为,ESI-MSn及紫外光谱特征,结合文献和已知化合物的裂解规律对白术与苍术中8个未知的差异性成分进行了初步推断,比较了白术与苍术中具体化学成分的差异。   三白术药材的质量标准的研究   1、本文选择白术内酯III作为白术的指标性成分,采用HPLC-DAD方法测定了白术中白术内酯III的含量,建立了其高效液相色谱含量测定方法,并采用该法对收集的17批白术商品药材进行测定。选择白术内酯I、II、III作为白术的指标性成分,建立了白术的薄层定性鉴别方法,该法简捷易行,结果直观,易于比较。   2、对白术样品进行了指纹图谱的研究。采用高效液相色谱法对白术进行指纹图谱研究,建立了白术的HPLC色谱指纹图谱,选择12个峰作为白术指纹图谱的共有峰,同时对不同收集地的白术药材进行分析,获取反映药材整体特征的化学数据,对所得到的化学数据分别用直观分析法和相似度计算法进行评价,为全面控制白术的质量标准提供了依据。   3、采用超高效液相色谱与质谱联用方法(UPLC-MS/MS)建立了同时测定白术中8个倍半萜类化合物的含量,并采用该法对收集的4批药材进行测定,结果表明该方法灵敏度高,选择性好,分析快速,准确度高。
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