【摘 要】
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目的：本实验旨在利用体细胞核移植技术生产小鼠的转基因克隆胚胎。 方法：构建了含新霉素抗性基因(Neo)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转
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目的：本实验旨在利用体细胞核移植技术生产小鼠的转基因克隆胚胎。
方法：构建了含新霉素抗性基因(Neo)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了小鼠胎儿成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞,两种细胞经G418筛选14天后用于核移植。同时以未转基因小鼠卵丘细胞和胎儿成纤维细胞为核供体,进行了小鼠的体细胞核移植,通过显微操作构建克隆胚胎。
结果：转基因与未转基因胎儿成纤维细胞重构胚的囊胚发育率(19.23％vs22.91％)差异不显著；卵丘细胞与转基因胚胎干细胞重构胚的囊胚发育率(41.17％vs41.54％)差异不显著；卵丘细胞与未转基因成纤维细胞重构胚的囊胚发育率(41.17％vs22.91％)差异显著。
结论：供体细胞的转基因与否对小鼠克隆胚胎的早期发育影响不明显；通过体细胞核移植技术,小鼠胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞可以有效地生产小鼠转基因囊胚；绿色荧光蛋白作为一种筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选。
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