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目的类风湿关节炎(RA)属于风湿性疾病的一种,也是全世界范围内最为严重和普遍的自身免疫性疾病。RA通常起病隐匿,发病痛苦,病程漫长;且病患个体差异性大,缺乏彻底治愈的治疗药品和手段;病情的恶化常引发关节畸形,严重者甚至致残。目前,关于RA的发病机制所公认的说法是免疫系统的紊乱,该过程中涉及到多个细胞因子在滑膜中的非正常作用,与许多复杂免疫反应有较大关联。对RA的表观遗传研究陆续发现有部分miRNA,不仅受到某些炎性细胞因子的调节,也可通过调控某些细胞因子或靶向某些免疫相关的基因的表达来影响RA的发生和发展。目前,RA领域已有数个miRNA的作用被一步步揭示出来,而miR-145在RA中的作用却未曾有人关注。癌症中miR-145的研究成果的较突出,可调节多种恶性表型相关的基因,抑制其转录或蛋白功能的正常行使,发挥抑制肿瘤的作用。因此,本课题把miR-145-5p作为研究对象,以期发现miR-145-5p在RA中的调控作用。方法本实验首先采用荧光定量PCR技术检测了20例RA患者PBMC细胞中miR-145-5p的相对表达量,并以20例普通人的PBMC中的含量作为对比,得到miR-145-5p的差异表达的结果。随后在RA患者的RA-FLS中转染miR-145-5p的mimic或inhibitor实现对miR-145-5p的过表达和敲减之后,进行RA-FLS细胞的增殖、周期、凋亡实验,得出miR-145-5p对细胞表型的影响。并通过荧光定量PCR实验检测过表达miR-145-5p后RA相关炎性因子基因的表达。接着运用生物信息学软件和通路分析来寻找与细胞增殖、周期和凋亡有关或与骨代谢通路相关的基因作为候选研究的靶基因,接着采用Q-PCR实验在转录水平上进行初步检测,最后经由western blot对待验靶在翻译水平上进行验证,最终明确miR-145-5p在RA中的功能及作用机制。结果1.对20例RA患者和20例正常人PBMC细胞中miR-145-5p的表达检测发现,RA病人PBMC中miR-145-5p的表达量比正常人PBMC中显著升高。2.RA-FLS中,过表达miR-145-5p后,细胞的增殖能力的降低比较明显;敲减miR-145-5p后,细胞的增殖能力的上调比较明显。该结果提示,miR-145-5p可能通过调节RA-FLS细胞的增值能力发挥对RA的作用。3.RA-FLS中,miR-145-5p含量升高后,可显著发现G2期的细胞数目减少;敲减miR-145-5p后,可显著发现G2期的细胞数目增多。分析上述可得出,miR-145-5p可能通过影响RA-FLS细胞的周期进程来影响细胞的增殖能力。4.RA-FLS中,过表达miR-145-5p的样本,凋亡的细胞数目比对照组的数目明显要高;敲减miR-145-5p的样本,凋亡的细胞数目比对照组显著减少。分析上述可得出,miR-145-5p可以影响RA-FLS的细胞凋亡过程。5.RA-FLS中,miR-145-5p水平的升高,可造成MMP9表达的下调。6.生物信息学预测出ADAM17为miR-145-5p的靶基因,其mRNA和蛋白含量在过表miR-145-5p后下调,敲减miR-145-5p后上调。结论miR-145-5p在RA患者PBMC中表达升高。在RA-FLS中,miR-145-5p可能通过靶基因ADAM17的表达来调节TNF-α、细胞增殖相关通路以及MMP9的表达,从而影响细胞的增殖、凋亡和细胞周期进程,对滑膜的炎症程度造成影响。