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背景和目的:肾部分切除术已经广泛用于治疗早期肾癌,术中阻断肾脏血流将对残留肾脏组织造成缺血再灌注损伤。目前对于不同的热缺血阻断时间对肾部分切除术后残余肾组织的影响尚未见详细报道。本实验通过建立大鼠肾部分切除术模型,研究肾部分切除术中阻断肾脏血流后,不同热缺血时间对肾组织中细胞间粘附分子ICAM-1及凋亡基因Bcl-2及Bax表达的影响,以提供初步的分子生物学证据以探索肾部分切除术阻断肾蒂的安全时限。
方法:40只健康Sprague-Dawley大鼠,重250~300g,随机分为肾蒂阻断组(A组)和肾动脉阻断组(B组),每组20只。根据阻断血流所致肾脏热缺血时间(warm ischemia time,WIT)的长短,两组均再分为5个组(WIT20、WIT30、WIT40、WIT50、WIT60,n=4)。2组大鼠均在腹腔麻醉后行开腹手术,分离右侧肾蒂或右侧肾动脉,然后使用光滑显微血管夹夹闭肾蒂或者肾动脉,并行右肾上极肾部分切除术,大小约1cm×0.5cm,使用纤丝速即纱迅速止血,然后分别在阻断血流20、30、40、50、60分钟后松开显微血管夹恢复肾脏血流,检查创面无明显出血后逐层关腹。另选4只健康大鼠作为假手术对照组(WITO),快速行开腹手术,游离肾蒂,但不阻断肾脏血流。大鼠缺血再灌注24小时后,再次手术切除右肾,右肾残留的肾脏组织分为2份,分别使用SABC法免疫组织化学检查及Real time PCR检测肾脏组织内细胞因子ICAM-1、Bcl-2和Bax mRNA的表达量。Real time PCR检测以管家基因β-actin为内对照,以循环阈值的差值(△CT)=CT(待测基因)-CT(参考基因)来比较mRNA表达量的高低。
结果:成功建立大鼠肾部分切除的动物模型,免疫组化染色结果显示各缺血组均可见肾小管细胞质内黄褐色ICAM-1颗粒阳性表达。40、50、60分钟组均为强阳性表达,且显著高于呈弱阳性表达的20、30分钟组及对照组(P<0.05)。肾动脉阻断组与肾蒂阻断组未见明显差异(P>0.05)。Real time PCR结果显示,各缺血组ICAM-1、Bcl-2和Bax表达量呈递增趋势,且均高于对照组(P<0.05),30分钟后mRNA表达量迅速升高。随着缺血时间延长,Bax升高较Bcl-2更为明显,Bcl-2/Bax比值明显下降。阻断肾动脉组与阻断肾蒂组未见明显差异(P>0.05).
结论:肾部分切除术时阻断肾脏血流将造成肾脏组织缺血再灌注损伤,且随着热缺血时间的延长,肾细胞损伤和凋亡呈增加趋势。30分钟热缺血时间对肾部分切除后残留的肾脏组织无明显影响,可能是肾脏血流阻断的安全时限。