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第一部分Neurofibromin在癫痫动物模型中的表达目的：研究Neurofibromin在匹鲁卡品癫痫模型大鼠脑组织的时空变化规律,从而探讨与癫痫的相关性。方法：1、将64只雄性成年的SD大鼠随机地分为8个组：7个实验组(各组n=8)和1个正常对照组(n=8)。7个实验组分别为6小时、24小时、72小时、7天、14天、30天、60天。将7个实验组的所有大鼠构建成氯化锂-匹罗卡品点燃的颞叶癫痫模型2、分别采用免疫组化,免疫荧光及Western blot技术检测Neurofibromin在氯化锂-匹鲁卡品模型大鼠海马及皮质中表达的时间及空间的变化规律。结果：1、免疫组化结果显示Neurofibromin在神经元胞浆表达,主要在海马DG区、CA1、CA2及CA3区和皮质表达。与对照组相比,可以观察到实验组在点燃后6小时、24小时、72小时、1周、2周、1月、2月表达逐渐增高,其中有显著差异从1周(P(0.05)开始,在海马组织中表达在2月时达高峰,在皮质1月达高峰,在2月时较1月稍低。2、免疫荧光结果显示Neurofibromin在点燃后大鼠海马及皮质神经元上表达,而不与神经胶质细胞共表达。3、Western blot结果显示Neurofibromin在点燃后大鼠海马及皮质中1周时升高具有显著差异(P<0.05),之后逐渐升高,在海马组织中高峰在2月,而皮质中高峰在1月,其表达规律与免疫组化所观察到的结果一致。结论：Neurofibromin在癫痫模型大鼠脑组织中神经元表达,各个时间点的表达增加,在海马及皮质均从1周时表达升高具有显著差异,在海马中2月达高峰,在皮质1月达高峰,提示Neurofibromin可能参与癫痫的发生发展。第二部分Neurofibromin在癫痫动物模型痛性发作中的功能目的：探讨Neurofibromin在匹鲁卡品癫痫模型大鼠痫性发作中的功能。方法：1、选取雄性成年SD大鼠32只,随机分成4个实验组(各组n=8)：正常对照组、生理盐水组、空载体组、siRNA组。对生理盐水组、空载体组及siRNA组的大鼠海马区分别注射生理盐水、空载体Neurofibromin干扰病毒,注射药物7天后将4个组的所有大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品,然后观察各组大鼠痫性发作的潜伏期、持续时间及发作频率变化。2、采用Western blot技术检测上述大鼠7天时海马区Neurofibromin表达量变化。结果：1、各组大鼠痫性发作的潜伏期变化：对各组大鼠痫性发作的潜伏期进行统计后结果为：正常对照组为(20.29±4.23)min、生理盐水组为(19.25±5.55)min、空载体组为(18.62±6.38)min、siRNA组为(29.00±5.35)min。siRNA组的潜伏期比其他三组明显延长,差异具有显著性(P<0.05),而其他三组的潜伏期无显著差异。2、各组大鼠痫性发作的频率变化：统计各组大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品后2小时内发作次数为：正常对照组为16.63次、生理盐水组为16.79次、空载体组为17.92次、siRNA组为6.86次。siRNA组的发作频率较其他三组明显缩短,差异具有限制性(P<0.05),而其他三组发作频率无显著差异。3、各组大鼠痫性发作的持续时间变化：对各组大鼠痫性发(Racine评分为4级及以上)的持续时间进行统计后结果为：正常对照组为(22.00±4.69)min、生理盐水组为(24.29±4.42)min、空载体组为(22.50±3.78)min、siRNA组为(16.29±2.29)min。siRNA组的持续时间较其他三组明显缩短,差异具有显著性(P<0.05),而其他三组无显著差异。4、Western blot结果显示在注射药物7天Neurofibromin在siRNA组蛋白表达量较其他三组明显降低,差异具有显著性(P(0.05),而其他三组蛋白表达量无显著差异。结论：siRNA降低Neurofibromin的表达后,氯化锂-匹罗卡品药物诱发大鼠痫性发作的潜伏期延长,持续时间及发作频率缩短。因此Neurofibromin可能诱发癫痫发生。