论文部分内容阅读
内生真菌是生物农药的重要研究对象之一。本实验是在已分离出具有抑菌活性的喜树内生真菌G4菌的基础上进行的,旨在为新型生物农药的开发研究提供素材及理论参考。本文主要研究了喜树内生真菌G4菌的发酵条件优化、活性物质的分离鉴定及其抑菌活性的研究。主要研究结果如下: 1.采用单因素优化法,对碳源、氮源、初始pH、培养温度、培养液体积、接菌量6因素进行优化,以发酵液对茄褐纹(Phomopsis vexans(Sacc.etSyd) Harter)72h的抑制率高低为衡量标准。发酵条件的单因素优化实验数据表明,适宜单因素条件为,碳源为果糖、氮源为蛋白胨,初始pH为7、培养温度28℃,培养液体积为75mL,接菌量15%。 2.采用L18(36)设计碳源、氮源、初始pH、温度、培养液体积、接菌量6因素的正交试验,设6因素3水平。实验数据显示,各因素对抗菌发酵液的影响程度依次为碳源>接菌量>培养液体积>氮源>温度>初始pH;最佳发酵条件组合为蔗糖、硝酸钠、初始pH为8、温度为24℃、培养液体积为125mL、接菌量为25%。 3.通过将培养时间设为3d,4d,5d,6d,7d,8d,9d,10d,11d,再检测发酵液对茄褐纹的抑制作用。实验结果表明培养时间为7d时,发酵液对病原菌茄褐纹抑制率最高,72h的毒力回归方程为y=1.0043x+1.9154,EC50为1174.90 mg/L。 4.对发酵液的萃取表明,乙酸乙酯的萃取效果最好,浓度在100mg/L下萃取物对病原菌茄褐纹72h抑制率为51.3%,毒力回归方程为y=1.3363x+2.3004,EC50为104.71mg/L,将乙酸乙酯萃取产物经硅胶柱层析后,得到两组活性成分A7与A11,在100mg/L浓度时对病原菌茄褐纹72h抑制效率为36.1%、32.0%;对A7与A11的鉴定结果为有酚类、芳香类、酯类、烃类、酮类等多种化合物,抑菌物质可能为其中一类或多类。 5.菌丝的提取表明,乙酸乙酯对菌丝的提取效果最好,提取物在100mg/L浓度时,对病原菌茄褐纹72h抑制率为59.1%,毒力回归方程为y=0.8437x+3.7527,EC50为30.20mg/L,菌丝的提取物经硅胶柱层析后得到具有抑菌活性的组分B4,在100mg/L水平上对病原菌茄褐纹72h抑制率为35.1%,毒力回归方程为y=2.0220x+0.3879,EC50为190.55mg/L。