【摘 要】
：
目的:建立一种灵敏度高、特异性好、精确、简便的逆转录-聚合酶链反应-微孔板酶联夹心杂次技术,对人FGF mRNA进行半定量检测.方法:用Primer Premier5.0软件设计FGF引物及探针
论文部分内容阅读
目的:建立一种灵敏度高、特异性好、精确、简便的逆转录-聚合酶链反应-微孔板酶联夹心杂次技术,对人FGF mRNA进行半定量检测.方法:用Primer Premier5.0软件设计FGF引物及探针.上游引物和下游引物分别位于FGFF基因不同的外显子;捕获探针3端用氨基修饰,可以与DNA结合微孔板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被于微孔板内;检测探针5端用生物素修饰,可与亲和素标记的辣根过氧化物酶(Avidin—HRP)结合.抽取人外周静脉血,EDTA抗凝,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,用异硫氰酸胍—酚—氯仿一步法提取单个核细胞总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,然后利用FGF引物进行PCR扩增.扩增产物热性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶及其底物,显色,在450nm波长下测吸光度值.结论:该方法操作简便,灵敏度高,特异性强,精密度好,结果数据化,适合于细胞因子mRNA的半定量检测.
其他文献
目的： 1、观察基底刚度改变对宫颈癌HeLa细胞形态、细胞骨架、细胞增殖活性的影响; 2、研究基底刚度改变对宫颈癌HeLa细胞的细胞周期及细胞凋亡情况的影响; 3、研究
目的:评价与分析已预防性给予术后止吐药的妇科患者，术后仍发生恶心呕吐的危险因素。 方法:选择妇科手术患者1000例，收集其年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、晕动病史、手术史
目的:血压盐敏感性是高血压的一个中间遗传表现型,其遗传标记的研究是探索盐与高血压关系的核心所在.在盐敏感者众多生理、生化异常中,肾脏排钠缺陷处于中心环节,敏感性高血
目的:观察TAES对皮肤不同部位电刺激痛阈有无影响,以及其间脑脊液中β-内啡肽(β-EP)和八肽胆囊收缩素(CCK-8)的变化;观察TEAS用于上腹部手术后是否具有镇痛作用. 方法:(1)20
目的为了证实它在小儿中枢神经系统感染诊断中的作用,该研究应用双位点夹心化学免疫荧光法(immunoluminometric assay ILMA)对67例中枢神经系统感染患儿的血浆PCT水平进行测
目的： 通过对高危新生儿进行听力筛查，探讨新生儿听力障碍的相关高危因素，为其高危因素孕产妇人群提供孕前及围产期预防和干预，从而降低听力障碍等出生缺陷的发生。 方法：
目的:(1)应用FTIR对食管癌及癌旁正常组织结构进行研究,对各自的与病理资料相应的光谱数据进行指认.(2)通过对胆囊正常、炎性和癌组织中蛋白质、核酸和磷脂等生物大分子的结
目的:评估不同剂量咪达唑仑对中国患者麻醉前后遗忘程度的影响及其产生的不良反应。 方法:这是一项双盲随机对照研究，共纳入150例行择期全麻手术的患者(ASA分级Ⅰ-Ⅱ级，年龄
传统的八进制不能完美的调解键空光信号,因此马赫-曾尔延时利用检查模块的工作原理,对八进制的相移控制格式进行了改革。在这改革中,其改革方案非常有意义,能够将产差分八进