论文部分内容阅读
鸡白细胞介素2(Chicken interleukin-2,IL-2)主要是由激活的T细胞产生的一种糖蛋白,在机体免疫应答和免疫调节等一系列过程中发挥重要作用,作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。本试验成功克隆、表达和纯化了鸡IL-2,在生物学活性检测基础上,研究其作为免疫增强剂与H5N1禽流感灭活苗联合应用的效果,为进一步研究鸡IL-2对病毒疫苗的免疫增强作用奠定基础。本研究根据GenBank发表的鸡IL-2 cDNA序列设计一对引物,利用RT-PCR技术,从经Con A诱导的鸡脾脏淋巴细胞扩增鸡IL-2基因。琼脂糖凝胶电泳显示目的片段为533 bp。序列测定结果显示,克隆的鸡IL-2基因与参考的GenBank发表的鸡IL-2基因序列同源性为99.8%。将ChIL-2基因亚克隆到原核表达载体pET-30(a+)中,构建重组表达质粒pET-ChIL-2并转化大肠杆菌BL21,于37℃经1 mmol/L IPTG诱导表达7 h,SDS-PAGE和Western blot分析表明ChIL-2基因在大肠杆菌中获得了高水平表达,表达的融合蛋白分子量约为21 KD,且主要以包涵体形式存在。将包涵体经镍亲和层析柱纯化和复性处理,MTT试验结果表明,ChIL-2对经Con A活化鸡脾脏淋巴细胞具有明显的体外增殖作用,这表明ChIL-2具有相应的生物学活性,为后续动物免疫试验提供了理论基础。动物免疫试验分为4个处理组,即PBS缓冲液组(P组)、H5N1禽流感灭活苗免疫组组(V组)、H5N1禽流感灭活苗免疫和ChIL-2处理组(V+IL组)、空白对照组(C组)。利用淋巴细胞转化试验、血凝抑制试验及流式细胞术对不同日龄、不同处理组雏鸡各项免疫指标进行了检测,同时对各组免疫器官增重指数和免疫保护率进行了比较。结果表明:重组ChIL-2蛋白增强了禽流感疫苗的免疫效果,增加了外周血和免疫器官中淋巴细胞的转化率及CD4+﹑CD8+亚型淋巴细胞的数量,同时提高了免疫器官增重指数和血清中抗体水平。动物攻毒实验结果表明:V+IL组能够在疫苗免疫的基础上,显著提高禽流感灭活苗对强毒攻击的保护。综上所述,本实验克隆表达的重组ChIL-2具有相应的生物学活性,在联合禽流感灭活苗免疫过程中,不但能够促进机体的细胞免疫应答能力,而且能够提高机体体液免疫应答的能力,促进机体产生较强的免疫力以抵抗病毒的攻击,从而证明重组鸡IL-2是一种有效的免疫增强剂,为进一步研究本重组鸡IL-2的免疫佐剂作用奠定了理论基础。