【摘 要】
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目的了解湛江地区鲍曼不动杆菌的耐药现状和耐药水平;掌握鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶的种类与水平及其与耐药性的关系;对耐药基因进行定位;证实鲍曼不动杆菌流行株耐药性与外
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目的了解湛江地区鲍曼不动杆菌的耐药现状和耐药水平;掌握鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶的种类与水平及其与耐药性的关系;对耐药基因进行定位;证实鲍曼不动杆菌流行株耐药性与外膜蛋白的相关性;分析主动外排机制、基因突变与耐药性的关系,为临床治疗鲍曼不动杆菌感染合理应用抗生素及流行病学提供实验依据和指导.方法1.湛江地区鲍曼不动杆菌的分离鉴定.2.鲍曼不动杆菌对抗生素的敏感性测定:(1)利用K-B法,测定鲍曼不动杆菌对21种抗生素的敏感性;(2)利用琼脂稀释法,测定鲍曼不动杆菌对8种抗生素的最小抑菌浓度(MIC).3.碱裂解法和SDS裂解法抽提鲍曼不动杆菌的质粒,高温高浓度SDS双重处理交替培养法和SDS法消除质粒.4.碘-淀粉法、三维试验、EDTA协同试验、纸片确证试验测定鲍曼不动杆菌的青霉素酶、头孢菌素酶、金属β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).5.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鲍曼不动杆菌的外膜蛋白.6.直接荧光法检测鲍曼不动杆菌对环丙沙星的吸收和积累.7.聚合酶链反应(PCR)扩增鲍曼不动杆菌耐药基因Tem-1、AAC-4、gyrA并对gyrA基因进行测序分析.结论1.K-B法和琼脂稀释法对抗生素的药敏结果表明:湛江地区鲍曼不动杆菌的耐药现状十分严重,且多重耐药菌株分布十分广泛.2.鲍曼不动杆菌的质粒携带率较高,除7株菌株的部分耐药基因定位于质粒外,其余菌株的耐药性与质粒无关.3.鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药主要是因为产生四种β-内酰胺酶,产酶基因的成功扩增更进一步证明了这一耐药机制.4.鲍曼不动杆菌对喹诺酮类和氨基糖甙类抗生素耐药与外膜蛋白的低通透性和主动外排有关.5.鲍曼不动杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药与gyrA基因突变有关.6.鲍曼不动杆菌对氨基糖甙类抗生素的耐药与AAC-4基因无关,可能存在其他耐药基因或以外膜蛋白通透性降低为主.
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